ICS 11.100 SN C 62 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5108—2019 国境口岸轮状病毒、星状病毒、诺如病毒、 札如病毒四联HRMA检测方法 Detection of rotavirus, astrovirus, norovirus and sapovirus by quadriplex HRMA at frontier ports 行业标准信息服务平台 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5108—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国拱北海关，深圳市计量质量检测研究院。 本标准主要起草人：汪海波、莫秋华、杨泽、兰全学、杨国武、史咏梅、涂承宁、林继灿。 行业标准信息服务平台 SN/T5108—2019 国境口岸轮状病毒、星状病毒 诺如病毒、札如病毒四联HRMA检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸轮状病毒、星状病毒、诺如病毒和札如病毒这四种病毒的检验对象、方法、结 果报告、生物安全要求及阳性结果判定。 本标准适用于入出境人员携带轮状病毒、星状病毒、诺如病毒、札如病毒的实验室检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用 SN/T1193基因检验实验室技术要求 SN/T1720出人境口岸轮状病毒感染监测规程 3术语和定义 3.1 轮状病毒Rotavirus 属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）轮状病毒属（Rotauirus），其基因组由ll个不连续的双链RNA基 因片段组成，分别编码6种结构蛋白（VP1～VP4VP6、VP7）和6种非结构蛋（NSP1～NSP6）。轮状病 毒有7个血清组（A～G),其中A、B,C组能引起人和动物腹泻。 3.2 星状病毒Astrovirus 属于星状病毒科（Astroviridae）哺乳类星状病毒属（Mamastrovirus），为单股正链RNA病毒，基因 组长约6.8kb，从5端到3端包括一个约85个核苷酸的5非编码区（5non-codingregion，NCR），三 个开放读码框架ORF1a、ORF1b和ORF2，一个约80个核苷酸的3非编码区和一个大约30个核苷酸 的多聚腺苷酸尾。星状病毒是引起婴幼儿、老年人、免疫功能低下或缺失者急性腹泻的重要病原体。 3.3 诺如病毒Norovirus 诺瓦克样病毒Norwalk-likeviruses 诺沃克样病毒Norwalk-likeviruses 属于杯状病毒科（Caliciviridae）诺如病毒属（Norovirus），为单股正链RNA病毒，基因组长约 7.6kb，包括3个开放阅读框（openreadingframes，ORFs)ORFsl、ORFs2和ORFs3。诺如病毒可分为 5个型，分别为GI、GII、GIII、GIV和GV，其中GIGII和GIV感染人，是引起成人和婴幼儿急性非细菌 1 SN/T 5108—2019 性胃肠炎的重要病原体，全世界范围内均有流行，全年均可发生感染， 3.4 扎如病毒 Sapovirus 属于杯状病毒科（Caliciviridae），为单股正链RNA病毒，核酸序列长约7.5KB，包括2个开放读 码框,ORF1和ORF2。SV可分为5个遗传型，即GI、GII、GIII、GIV和GV,除GIII型感染猪外，其他 四型均感染人。 3.5 高分辨率熔解曲线分析技术highresolutionmeltinganalysis;HRMA 利用最新一代饱和荧光染料，实现分辨率高达0.01℃的熔解曲线精确分析的技术。相对于传统的 PCR技术或实时荧光PCR技术而言，操作步骤大大简化，而且无需使用昂贵的探针，时间和成本也降 低了不少，并且样品经PCR扩增后直接进行HRMA分析，无需转移，真正实现了闭管操作，降低了污 染的风险。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件： bp:basepair，碱基对； -DEPC：diethylpyrocarbonate，焦碳酸乙二酯； -PAGE：polyacrylamidegelelectrophoresis，聚丙烯酰胺凝胶电泳。 5检测对象 业标、 5.2其他申请检验的人员。 生物安全和PCR防污染要求 实验室生物安全应符合GB19489的规定。按照《人间传染的病原微生物名录》，这四种病毒的危 您服务平台 害程度均为第三类，可在生物安全二级实验室进行相关操作。PCR防污染措施按WS/T230和 SN/T1193的规定执行。 7主要仪器 本方法所用的主要仪器如下： 二级生物安全柜； 台式高速冷冻离心机（最高离心力12000rpm以上）； 旋涡振荡器； 一冰箱：4℃、一20℃和-70℃； 超净工作台； 一 微型离心机； Rotor-GeneQPCR热循环仪（带高分辨率熔解曲线分析模块）； 注：给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可和推荐。如果其他等效产品具有相同的 2