SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4629—2016 检疫性有害生物凭证标本核酸制备、 保存与管理规范 Preparation.preservation and management specification for nucleic acid of quarantine pest voucher specimens 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4629—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：宋云、陈岩、吕继洲、赵文军、吴绍强、朱水芳。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4629—2016 检疫性有害生物凭证标本核酸制备、 保存与管理规范 1范围 本标准规定了检疫性有害生物凭证标本核酸保存与管理的要求。 本标准适用于检疫性有害生物凭证标本核酸保存与管理。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 凭证标本 voucherspecimens 具有完备的采集、鉴定信息（采集人、日期、地点、生境、鉴定人、种名等），用于物种复核、引证、溯源 并永久保存的标本 3.2 核酸 nucleicacid 核酸分子分为两类：脱氧核糖核酸（DNA)和核糖核酸（RNA），是细胞内携带遗传信息的物质。 业标准 4核酸的处理 4.1 常用设备 针对不同来源的材料和样品采用不同的处理方法，常用设备参见附录A。 4.2 核酸来源 对于昆虫、真菌、线虫、细菌、病毒、杂草，核酸来自于有害生物个体或纯培养，病毒及植原体及难养 细菌来自于染病植物材料。 4.3核酸提取 4.3.1核酸的释放 4.3.1.1机械法 包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解、液氮研磨和颗粒破碎等物理裂解方法。这些方法用 机械力使细胞破碎 1 SN/T 4629—2016 4.3.1.2化学法 在一定的pH环境下，加入表面活性剂或强离子剂（CTAB、SDS等）使细胞裂解，蛋白质和多糖沉 淀，核酸从细胞内释放出来。向缓冲液中加入一些金属离子鳌合剂抑制核酸酶的活性，保护核酸不 降解。 4.3.1.3酶法 通过加溶菌酶或蛋白酶（如蛋白酶K)使细胞破裂，核酸释放。蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋 白质，促进核酸的分离。 4.3.2核酸的分离纯化 4.3.2.1酚/氯仿抽提法 离心分离。疏水性的蛋白质被分配至有机相，核酸则被留于上层水相。在含核酸的水相中加入醋酸钾 或醋酸钠，形成核酸盐，核酸盐可被一些有机溶剂沉淀，离心得到的核酸可以用70%乙醇洗涤以除去多 余的盐分，即可获得一定纯度的核酸。 4.3.2.2固相抽提法 因分离和纯化同步进行，并且有商品试剂盒供应而被广泛应用于核酸的纯化。固相抽提方法的固 相支持物有硅胶、玻璃颗粒、硅藻土、磁性颗粒、阴离子交换载体等，在一定的离子环境下，核酸可被选择 性地吸附到固相支持物而与其他生物分子分离， 4.4核酸的质量检测 完整性检测：通过凝胶电泳检测DNA为明亮单一的条带：RNA为28s（23s）、18s（16s）、5.8s （5s）三条清晰的rRNA条带，且28s与18s条带亮度比值约2：1。 浓度检测：核酸浓度不少于100ng/uL，体积不少于100uL。 符合上述要求的核酸可用于进一步保存，否则需重新提取。 核酸提取过程中采取防止交叉污染措施并符合SN/T1193的要求。 4.5保存 4.5.1保存管 使用在一80℃条件下专用的冻存管保存。RNA要求离心管DEPC处理过 4.5.2标签 利用透明的可在一80℃不脱落的标签，标签内容：样品编号（SampleID），采集编号（Collection Number)，科中文名（ChineseNameoffamily），科拉丁名（LatinNameofFamily），属中文名（Chinese NameofGenus），种中文名（ChineseNameofSpecies），保存时间，含量，鉴定人，单位，联系方式 4.5.3保存盒 统一使用100管/盒的纸盒保存，保存盒分为昆虫、真菌、细菌、病毒、线虫及杂草几类，在盒子侧面 贴标签，标签包含种类名称。 2