SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4545.1—2016 商品化试剂盒检测方法 沙门氏菌 方法一 Commercial kit methodSalmonellaTest method I 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4545.1—2016 前言 本部分是SN/T4545的第1部分 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、广州华峰生物科技有限公司。 本部分主要起草人：邵碧英、郑晶、董健、陈彬、黄晓蓉、彭华毅、林杰。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4545.1—2016 商品化试剂盒检测方法 沙门氏菌方法一 1范围 SN/T4545的本部分规定了食品中沙门氏菌的环介导恒温核酸扩增（LAMP)检测方法。 本部分适用于家禽、鱼类和海产品、乳制品和杂品中沙门氏菌的筛选检测 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法 SN/T3266食品微生物检验方法确认技术规范 3生物安全措施 为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测沙门氏菌。所有培养物、 DNA提取物和废弃物应按照GB19489和GB/T27403中的有关规定执行。 4技术概要 利用环介导恒温扩增（loop-mediatedisothermalamplification，LAMP）技术进行沙门氏菌的筛选 检测。根据沙门氏菌属特有靶序列上的6个独立区域，采用4条特异引物及一种链置换活性的DNA 聚合酶，在65℃左右完成恒温扩增。在环介导恒温扩增反应中，产生肉眼可见的副产物焦磷酸镁乳白 色沉淀，反应产物在荧光染料的作用下，阴阳性结果产生显色差异，即可通过颜色变化观察判定结果 5试剂和材料 5.1 沙门氏菌核酸LAMP检测试剂盒 织评价。具体评价结果参见附录A。试剂盒组成如下： a）DNA提取液。 b) 沙门氏菌HF反应管：为环介导恒温扩增反应管，每管内含22.5μL工作液（包括反应液及Bst DNA聚合酶），2μL显色液和50μL稳定液。 1 SN/T 4545.1—2016 c) 阳性对照：沙门氏菌DNA。 d) 阴性对照。 试剂盒储存于一20℃以下，有效期6个月。试剂盒内各试剂使用前，充分解冻，并避免反复冻融。 5.2 沙门氏菌质控菌株 实验室保存的沙门氏菌标准菌株或沙门氏菌标准菌株的DNA。 6仪器和设备 6.1移液器：量程0.5μL~10μL；量程10μL~100μL；量程100μL~1000μL。 6.2高速台式离心机：转速不低于10000r/min，最大相对离心力不低于7000g。 6.3水浴锅或加热模块：65℃±1℃和100℃±1℃。 6.4计时器。 检测程序 食品中沙门氏菌LAMP检测程序见图1。 选择性增菌液或待测菌株 细菌DNA提取 LAMP反应 结果观察 阴性 阳性 传统方法确认 报告 图 1 食品中沙门氏菌LAMP检测程序