SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4537.2—2016 代替SN/T2058—2008 商品化试剂盒检测方法 氯霉素 方法二 Commercial kit method- ChloramphenicolTest method IⅡI 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4537.2—2016 前言 SN/T4537《商品化试剂盒检测方法 氯霉素》共分为3部分： SN/T4537.1:方法一； -SN/T4537.2:方法二； SN/T4537.3：方法三。 本部分为SN/T4537的第2部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分代替了SN/T2058一2008《进出口蜂王浆中氯霉素残留量的测定方法 酶联免疫法》，与 SN/T2058一2008相比，主要技术变化如下： 部分名称由《进出口蜂王浆中氯霉素残留量的测定方法 酶联免疫法》改为《商品化试剂盒检 测方法氯霉素方法二》。 附录中增加了试剂盒的评价结果 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、荷兰EURO-PROXIMA公司。 本部分主要起草人：张晓峰、吴姗、邵宏宏、帅江冰、李可。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T2058—2008。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4537.2—2016 商品化试剂盒检测方法 氯霉素 方法二 1范围 SN/T4537的本部分规定了蜂王浆及冻干粉中氯霉素残留量的酶联免疫测定方法。 本部分适用于蜂王浆及冻干粉中氯霉素残留量的筛选测定 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法 3方法提要 本标准以三氯乙酸来沉淀蜂王浆的蛋白和提取蜂王浆中氯霉素，然后以固相萃取柱净化。微孔板 中包被有绵羊抗兔IgG抗体，加入特异性抗体（兔抗氯霉素抗体）、酶标记氯霉素、氯霉素标准品或样品 提取液后，特异性抗体与包被的绵羊抗兔IgG抗体结合，同时游离氯霉素和酶标记氯霉素竞争性的与 特异性抗体结合。通过洗涤除去未结合的氯霉素和酶标记氯霉素，然后加入底物显色，用酶标仪测定吸 光度，根据吸光度值得出试样中氯霉素的含量 4 试剂和材料 除注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 氯霉素检测试剂盒。 本试剂盒按照SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会评价。具体评价 参见附录A。试剂盒组成如下： a）预包被抗体的96孔板：12条×8孔。 b) 氯霉素标准溶液：0.025ng/mL.0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL0.5ng/mL、2ng/mL和 100ng/mL. c) 重组/零标准缓冲液。 d) 标记物溶液。 e) 抗氯霉素抗体冻干粉：根据氯霉素试剂盒中说明，可用重组/零标准缓冲液配制成抗氯霉素抗 体溶液。 f) 底物TMB溶液。 1 SN/T 4537.2—2016 g）稀释缓冲液：可用水4倍稀释后使用。 h) 洗涤浓缩液：可用水10倍稀释后使用。 i) 反应终止液：试剂盒应在4℃～8℃避光条件下保存，溶解后的酶标记物和抗体溶液需一15℃ 条件冻存。 4.2 2三氯乙酸。 4.3甲醇。 4.4异辛烷。 4.5 ”三氯甲烷。 4.65%三氯乙酸：5.0g三氯乙酸（4.2)以水溶解并定容至100mL。 4.730%甲醇：30.0mL甲醇（4.3)以水定容至100mL。 4.8异辛烷-三氯甲烷混合液：异辛烷、三氯甲烷以2：3（体积比）的比例混合。 4.9HLB固相萃取柱：Oasis（或相当产品），3mL（60mg）。 4.10氯霉素标准品：纯度≥98%。 4.11氯霉素标准品溶液的配制：称取0.01g氯霉素标准品，以甲醇定容至100mL，配制成100μg/mL 的工作液，于4℃～8℃条件下保存。 4.12空白样品：选取已确切知道不含有氯霉素滴蜂王浆样品，作为空白样。用于随样测试的加标监控 实验。 5仪器 5.1酶标仪。 5.28道移液器：10μL~100μL 5.3单道移液器：10μl~100μL,20μL~200μL,100μL~1000μl和2mL~10mL。 5.4混合振荡器。 5.5 5高速低温离心机（6000r/min以上）。 业标准信息服务 5.6 5.7氮吹仪。 5.8具塞试管：50mL。 5.9 电子天平：0.01g~100g。 6 试样的制备和保存 6.1试样的制备 原始样品总量不得少于200g，蜂王浆充分搅拌均匀后，将样品分成两等份，冻干粉采用四分法，将 样品分成两等份。分好的样品装入洁净容器，加封并做标识。 6.2 2试样的保存 试样放置-20℃～-18℃条件下保存 2