SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4537.1—2016 商品化试剂盒检测方法 氯霉素 方法一 Commercial kit method- ChloramphenicolTest method I 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4537.1—2016 前言 本部分是SN/T4537系列标准的第1部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、北京勤邦生物技术有限公司。 本部分主要起草人：邹明强、薛强、王燕飞、万宇平、罗晓琴。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4537.1—2016 商品化试剂盒检测方法 氯霉素方法 1范围 SN/T4537的本部分规定了食品中氯霉素酶联免疫检测方法。 本部分适用于采用酶联免疫竞争法定性定量检测鸡肉与虾肉中的氯霉素。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法 3原理 在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样品中残留的氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争氯霉 素酶结合物，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较再乘 以其对应的稀释倍数，即可得出样品中氯霉素的含量。 4试剂与材料 4.1 氯霉素酶联免疫检测试剂盒 在2℃~8℃条件下运输与保存，产品有效期12个月。 本试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会进行了评价，评价 结果参见附录A。试剂盒组成如下： a) 96孔酶标板×1块，包被有偶联抗原： 服务平台 b）标准液×6瓶，1mL/瓶，浓度分别为0×10-0.025×10-9，0.075×10-9，0.3×10-9，1.2× 10-",4.8×10-°; c) 高浓度标准品：1mL/瓶，浓度为100×10-， 酶结合物工作液，7mL； e) 底物液A液，7mL； f) 底物液B液，7mL； g) 终止液，7mL； h) 20×浓缩洗涤液，40mL； i) 2×浓缩复溶液，50mL。 乙酸乙酯（分析纯) 4.3 正已烷（分析纯） 4.4 去离子水 1 SN/T 4537.1—2016 5仪器与设备 5.1微孔板酶标仪450nm/630nm。 5.2旋转蒸发仪/氮气吹干装置。 5.3均质器。 5.4振荡器。 5.5涡旋仪。 5.6离心机。 5.7天平：感量0.01g。 5.8刻度移液管：10mL。 5.9洗耳球。 5.10玻璃试管：10mL 5.11 聚苯乙烯离心管：10mL、15mL、50mL。 5.12 6样品制备 6.1用均质器均质组织样本。 6.2称取3.0s士0.05g均质物至50mL聚苯乙烯离心管中，加入6mL乙酸乙酯，用振荡器振荡 5min，3000g以上，室温（20℃~25℃）离心5min。 6.3移取4mL上层有机相（约相当于2g的样本）至10mL干净玻璃试管中，于50℃~60℃水浴氮 气流下吹干。 6.4加人1mL正已烷，用涡旋仪涡动1min，再加1mL复溶工作液（见配液1），用涡旋仪涡动15s， 3000g以上，室温（20℃~25℃）离心5min。 6.5除去上层有机相，取下层50μL用于分析。 7 分析步骤 7.1将所需试剂从置于室温（20℃～25℃）平衡30min以上，液体试剂使用前摇匀。 7.2取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放人自封袋，保存于2℃～8℃。 7.3洗涤工作液在使用前也需回温。 7.4编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔 所在的位置。 7.5加标准品/样本：加标准品/样本50uL到对应的微孔中。 7.6加人酶结合物：加人酶结合物工作液50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境 中反应30min。 7.7洗板：揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μL/孔，充分洗涤4次～5次，每次间隔 10s，用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破 7.8显色：加人底物液A液50μL/孔，再加底物液B液50uL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置 25℃避光环境反应20min。 7.9测定：加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，最好用双波长450/630nm 检测，请在5min内读完数据，测定每孔OD值。 2