SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4009—2014 国境口岸蜱类携带嗜吞噬细胞无形体的 PCR 检测方法 Detection of Anaplasma phagocytophilum by PCR in ticks at frontier ports 行业标准信息服务平台 2014-11-19发布 2015-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4009—2014 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫 局、中华人民共和国四川出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：高玉峰、赵亮、邓华、陈肖潇、程晓兰、姜陆、宋锋林。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4009—2014 国境口岸蜱类携带嗜吞噬细胞无形体的 PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸蜱类携带嗜吞噬细胞无形体的检测对象、生物安全要求、样品采集及保存运 输、检测方法和结果判断。 本标准适用于国境口岸蜱类携带嗜吞噬细胞无形体的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T 1293 国境口岸蜱类监测规程 SN/T 1432 入出境列车医学媒介生物监测规程 SN/T 1553 入出境航空器医学媒介生物监测规程 SN/T 1560 入出境船舶医学媒介生物监测规程 SN/T 1596 入出境车辆医学媒介生物监测规程 WS233 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 蜱 tick 属蜱螨亚纲的寄螨目（Parasitiformes）、蜱总科（Ixodidea）。成虫在躯体背面有壳质化较强的盾板， 统称为硬蜱（hardtick），属硬蜱科（Ixodidae），背面无盾板者，统称为软蜱（softtick），属软蜱科（Argasi dae)。 3.2 嗜吞噬细胞无形体Anaplasmaphagocytophilum 嗜吞噬细胞无形体是专性细胞内寄生的革兰氏阴性菌，属立克次体目、无形体科，主要通过硬蜱叮 咬传播，可引起人粒细胞无形体病。 4检测对象 本标准检测对象包括： 出人境交通工具、集装箱、货物、行李等场所采集的游离蜱或从上述场所宿主体表采集的寄 生蜱； 口岸地区采集的游离蜱或从口岸地区宿主体表采集的寄生蜱 1 SN/T 4009—2014 5 生物安全要求 实验过程中生物安全要求如下： 检测工作中的个人防护参照GB19489； 实验室应遵循GB19489和WS233对生物安全2级（BSL-2)实验室的生物安全要求； 使用过的实验用品应遵循GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理。 6器材与试剂 6.1器材 本标准使用的主要仪器设备如下： 高速冷冻离心机； 高压蒸汽灭菌锅； PCR 仪; 生物安全柜； 电泳仪； 凝胶成像系统； 匀浆器等。 6.2 2试剂 本标准使用的主要试剂如下： 引物:外引物OUT-1及OUT-2、内引物IN-1及IN-2; -10XPCRBuffer(含Mg²+）; dNTPs; DNA Polymerase; 琼脂糖； 染色剂GelRed： "O"HPP. 7蜱类的采集及保存运输 7.1 采集 蜱类采集参照下列标准执行：SN/T1293SN/T1432、SN/T1553、SN/T1560、SN/T1596 7.2分装 将采集的蜱类现场分栋，按类别装入适当的容器（如：冻存管、离心管、塑料平皿等）加贴标签。标 签内容至少包括以下信息：编号、种类、采集时间、采集地点（生境）、采集人、宿主等。 7.3 3保存运输 分装完毕的蜱类样品，装人适当的冷冻、冷藏或常温装置，送实验室进行分类鉴定和嗜吞噬细胞无 形体检测。 2