SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3872—2014 出口食品中四种致病菌检测方法 MALDI-TOF-MS 法 Detection of four pathogens in food for export- MALDI-TOF-MS method 行业标准信息服务平台 2014-01-13 发布 2014-08-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3872—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局 本标准主要起草人：曹际娟、郑秋月、董伟峰、曹冬梅、黄大亮、赵昕、麻丽丹。 行业标准信息服务平台 SN/T 3872—2014 出口食品中四种致病菌检测方法 MALDI-TOF-MS 法 1范围 本标准规定了食品中四种致病菌的MALDI-TOF-MS检测方法。 本标准适用于食品中沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌四种致病菌的 快速检测，其他致病菌可参照使用。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB 4789.71 食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验 GB4789.30食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 SN0170 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法 SN/T0173进出口食品中副溶血性弧菌检验方法 SN/T0184.1进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法 SN/T1022进出口食品中霍乱弧菌检验方法 准信息服 NMKLNo.156食品中致病性弧菌的检测和计数 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 3.1 MALDI-TOF-MS: Matrix-Assisted Laser Desorption/lonization Time-of-Flight Mass Spectrome- try，基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱 3.2CHCAα-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid,α-氰-4-羟基肉桂酸。 3.3ACN:acetonitrile,乙睛。 3.4 TFA:trifluoroacetic acid,三氟乙酸。 4方法提要 MALDI-TOF-MS是应用于细菌全细胞快速检测的技术，主要依据存在于细菌表面特征性蛋白的 分子量信息，完成细菌的鉴定和分类。将待鉴定的菌落样品与适量的基质溶液点加在样品板上，溶剂挥 发后形成样品与基质的共结晶，利用激光作为能量来源辐射共结晶体，基质分子吸收能量与样品解吸附 1 SN/T 3872—2014 并使样品电离，经过飞行时间检测器，将不同质荷比的离子分开，形成细菌特异性的质谱图。将待测细 菌质谱图与已知细菌的标准蛋白质组指纹质谱数据库进行比较，可以确定细菌的种属，进行细菌鉴定， 从而对食品中的致病菌进行快速检测。 5试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均使用色谱纯试剂。实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。 5.1乙腈。 5.2无水乙醇。 5.3甲酸。 5.4 4三氟乙酸。 5.5 5α-氰-4-羟基肉桂酸。 5.6肽标准品：校准范围1000Da～4000Da。 5.7蛋白标准品：校准范围3000Da~25000Da。 5.8 3基质溶液：将基质CHCA粉末加入到含有50%乙睛、2.5%三氟乙酸的水溶液中，配制成饱和溶 液。基质溶液现用现配，每次使用时新鲜配制。 5.9 9标准品溶液：将1mg肽标准品干粉、1mg蛋白标准品干粉分别溶于ACN：TFA：水的比例为 主要仪器和设备 6.1基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪。 6.2离心机：最大离心力≥16000g。 6.3微量可调移液器和灭菌吸头:2μL,10μL,100μL，200μL,1000μL。 标准信息服务平台 7检测步骤 7.1检测流程图 食品中致病菌MALDI-TOF-MS检测流程见图1。 2