SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3731.2—2013 食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第2部分：鹅成分检测 PCR 法 Identification of poultry ingredient in food and feed- Part 2:Detection of anser ingredient-PCR method 行业标准信息服务平台 2013-11-06发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3731.2—2013 前言 SN/T3731《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法》共分为以下6个部分： 第1部分：鹤鹑成分检测PCR法： 第2部分：鹅成分检测PCR法： 第3部分：鸽子成分检测实时荧光PCR法： 第4部分：火鸡成分检测实时荧光PCR法； 第5部分：鸭成分检测PCR法； 第6部分：鹧鸪成分检测实时荧光PCR法。 本部分为SN/T3731的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验 检疫科学研究院。 本部分主要起草人：宗卉、花群义、韩建勋、汪燕玲、曹琛福、吕建强、吴亚君、卢体康、阮周曦、秦智峰。 行业标准信息服务平台 I SN/T3731.2—2013 食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第2部分：鹅成分检测PCR法 1范围 SN/T3731的本部分规定了食品及饲料中鹅成分检测的PCR方法。 本部分适用于食品及饲料中鹅成分的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 多聚酶链式反应polymerasechainreaction；PCR 一种体外扩增DNA的方法。PCR使用一种耐热的多聚酶，以及两条含有20个左右碱基的单链引 伸，反应液的游离核苷酸紧接着引物从5端到3端合成一条互补的新链。而新合成的DNA又可以继 续进行上述循环，因此DNA的数目不断倍增。 信息服务平台 3.2 TaqDNA酶Thermus aquaticus DNA polymerase 从Thermusaquaticus细菌中提取的耐热DNA聚合酶 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate） CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammoniumbromide） Tris：三（羟甲基）氨基甲烷[tris（hydroxymethyl)aminomethane EDTA：乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid) DNAMarker：核酸相对分子质量标准 5方法提要 1 SN/T 3731.2—2013 行PCR扩增，经电泳，在309bp大小处观察是否有扩增条带，必要时进行测序，来判断样品中是否存在 鹅成分。 6试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无 DNA酶污染的容器分装。 6.1检测用引物（对）序列 鹅成分扩增引物详见表1。 表1试验用引物 名 序列（5"-3"） 目的基因 鹅成分5端引物 F:5′-GTGGCTATTCCCAGTGAT-3' 鹅线粒体D-Loop区基因 鹅成分3端引物 R:5'-TATTTGGAAGTGGTGGGT-3' 6.2试剂 6.2.1 裂解液:1% CTAB;0.05mol/L Tris-HCl(pH8.0);0.7mol/LNaCl;0.01mol/LEDTA(pH8.0) 6.2.2 DNA聚合酶。 6.2.3 10XPCR缓冲液。 6.2.4 硫酸镁。 行业标准 6.2.5 dNTP混合液。 6.2.6 75%乙醇。 6.2.7 三氯甲烷。 6.2.8 异丙醇。 电泳缓冲液：Tris54g，硼酸27.5g,0.5mol/LEDTA：Tris-HCl(pH8.0)20mL,加蒸馏水至 信息服务平台 6.2.9 1000mL：使用时10倍稀释。 6.2.10 溴化乙锭（或等效染色剂）。 6.2.11 上样缓冲液。 仪器和设备 7.1 离心机（最大离心力大于12000g）。 7.2 微量移液器（100μL~1000μL，20μL~200μL，2μL~20μL，0.5μL~10μL)。 7.3 热循环仪。 7.4 恒温水浴锅。 7.5 天平：感量0.001g和0.1g。 7.6 涡旋振荡器。 7.7 pH计。 7.8电泳仪。 2