SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3581—2013 美澳型核果褐腐病菌实时荧光PCR 检测方法 Detection and identification of Monilinia fructicola (Winter) Honey with real-time fluorescence PCR 行业标准信息服务平台 2013-03-01发布 2013-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3581—2013 SN/T 3581—2013 参考文献 ［1］程颖慧，章桂明，王颖，等.应用TagManMGB探针检测美澳型核果褐腐病菌.广东农业科 学,2009,232(7):196-198. [2] van Leeuwen GCM, Baayen RP, Holb IJ & Jeger MJ.Distinction of the Asiatic brown rot fungus Monilia polystroma sp.nov.from Monilia fructigena, Mycological Research 2002,106, 444 - 451. 行业标准信息服务平台 书号：155066·2-25768 定价： SN/T3581-2013 14.00元 SN/T3581—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布结构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：程颖慧、王颖、章桂明、汪莹。 行业标准信息服务平台 I SN/T3581—2013 美澳型核果褐腐病菌实时荧光PCR 检测方法 1范围 本标准规定了美澳型核果褐腐病菌Moniliniafructicola（Winter）Honey的应用TaqManMGB 探针进行实时荧光PCR的检测方法。 本标准适用于美澳型核果褐腐病菌的寄主包括核果类水果，以及木瓜属、山楂属、枇杷属等传带美 澳型核果褐腐病菌的寄主上的该病菌的分子检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T1193基因检验实验室技术要求 SN/T1871美澳型核果褐腐病菌检疫鉴定方法 3原理 行业标 3.1病菌分类地位及形态特征 按照 SN/T 1871。 3.2鉴定原理 根据美澳型核果褐腐病菌与其近似种包括核果褐腐病菌和欧洲仁果褐腐病菌的内间隔转录区基因 的不同，设计特异性的引物和探针，应用相关仪器，包括实时荧光PCR仪等对美澳型核果褐腐病菌进行 慧服务平 实时荧光PCR鉴定。 4主要仪器用具和试剂 4.1主要仪器及用具 烘箱、高压灭菌锅、天平（感量1/100，1/10000）、研钵、摇床、水浴锅、制冰机、纯水仪、旋涡振荡器 台式离心机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、真空抽干仪、冰箱、超净工作台、实时荧光PCR仪、微量 4.2试剂 CTAB提取液、Tris饱和酚、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、无水乙醇、RNA酶、液氮、实时荧光PCR反应 缓冲液。 1