SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3330—2012 PCR 法 中国鲨物种鉴定方法 Protocol of identification for Tachypleus tridentatus-PCR method 行业标准信息服务平台 2012-12-12发布 2013-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3330—2012 行业标准信 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 中国凿物种鉴定方法PCR法 SN/T 33302012 中国标准出版社出版 北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013） 北京市西城区三里河北街16号（100045） 总编室：（010）64275323 网址www.spc.net.cn 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880X×12301/16 印张0.75字数14千字 2013年6月第一版 2013年6月第一次印刷 印数1—1600 * 书号：1550662-25387 SN/T3330-2012 定价16.00元 SN/T3330—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布结构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 疫局。 本标准主要起草人：尹伟力、方绍庆、王颖、岳志芹、许红岩、刘宁、钟响、鲁闽、段效辉、栾晶、张京宣、 粟智平、耿金培。 行业标准信息服务平台 SN/T 3330—2012 中国蜜物种鉴定方法 PCR法 1范围 本标准规定了中国鲨物种PCR鉴定方法。 本标准适用于进出境水产品以及含有中国鲨成分的生物制剂中对中国鲨的鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 聚合酶链式反应polymernasechainreaction;PCR 以耐热DNA聚合酶和一对引物（与待测目标核酸分子序列同源的DNA片段）通过高温（DNA分 子变性）和低温（引物利目标核酸分子复性并被耐热DNA聚合酶延伸）交替循环扩增待测目标核酸分 子的方法。 4原理 中国鲨（形态特征参见附录A）样本经过提取总基因组DNA后，利用设计的特异性引物，通过常规 PCR技术特异性扩增中国鲨mtDNACOX3基因片段（349bp）。根据PCR扩增结果判定中国鲨样本的 种类是否是中国鲨。特异性引物是通过比对中国鲨、圆尾鲨、美洲鲨、南方鲨等大多鲨的mtDNA COX3基因片段设计出来的。 5仪器设备和主要试剂 5.1仪器设备 PCR仪、组织研磨器、超净工作台、制冰机、高速冷冻离心机、水浴锅、台式小型离心机、常规冰箱、 旋涡振荡器、电泳仪、凝胶成像系统。 5.2主要试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯。 5.2.1水：应符合GB/T6682中一级水的规格。用于PCR（包括核酸提取）时所用的水均用DEPC处 理以除掉RNA酶。 1