SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3064.3—2011 国境口岸蝇类、镰携带重要病原体 检测方法 第3部分：志贺氏菌 Detections of important pathogens in flies and cockroachs at frontier port- 行业标准信息服务平台 Part 3:Shigella 2011-09-09发布 2012-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3064.3—2011 前言 SN/T3064《国境口岸蝇类、董携带重要病原体检测方法》分为11部分： 第1部分：通用要求； 第2部分：沙门氏菌； 第3部分：志贺氏菌； 第4部分：致泻性大肠杆菌； 第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌； 第6部分：霍乱弧菌； 第7部分：副溶血性弧菌； 第8部分：金黄色葡萄球菌； 第9部分：蜡样芽孢杆菌； 第10部分：甲型肝炎病毒； 第11部分：寄生虫卵（包囊）。 本部分为SN/T3064的第3部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、 本部分主要起草人：张霞、刘培、关淳、高旗利、张海滨、张海英 行业标准信息服务平台 I SN/T3064.3—2011 国境口岸蝇类、蛋携带重要病原体 检测方法 第3部分：志贺氏菌 1范围 SN/T3064的本部分规定了国境口岸输人性蝇类和蛋携带志贺氏菌的检测方法、结果判断、结 果报告、阳性结果处置及血清学分型（根据需要）。 本部分适用于检验检疫机构对输入性蝇类和董携带志贺氏菌的检测和报告。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T4789.5一2003食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验 GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 3样本检测 3.1培养基和试剂 需要的培养基和试剂为GN增菌液，HE琼脂，SS琼脂，麦康凯琼脂（MAC），伊红美蓝琼脂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯或生化纯，水为蒸馏水， 信息服务平台 除上述培养基和试剂外还需志贺氏菌诊断血清。 3.2检测程序 志贺氏菌检测程序参见附录A。 3.3操作步骤 3.3.1增菌 分别取1mL样本处理液加人到100mLGN增菌液中，将GN增菌液放人温箱中，36℃士1℃培 养6h～8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。 3.3.2分离 具体操作步骤见GB/T4789.5一2003中6.2。 3.3.3初步生化筛选 具体操作步骤见GB/T4789.5一2003中6.2。 SN/T 3064.3—2011 3.3.4血清学鉴定 在载玻片上分别加入一滴抗血清和生理盐水，用接种针挑取适量三糖铁斜面上的可疑培养物分别 加到抗血清和生理盐水中，前后摇动载玻片30s～60s，在黑色背景下观察。先用四种志贺氏菌多价血 查。如果由于K抗原的存在而出现不凝集，应将菌液煮沸后再检查。 3.3.5生化鉴定 抗血清凝集的培养物，应进一步进行生化鉴定，志贺氏菌生化特性见表1。也可用API20E或 VITEK进行生化鉴定。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌抗血清发生凝集，仍不得判定 为志贺氏菌属的培养物。 表1 志贺氏菌属生化特性 葡萄糖铵 阴性 西蒙氏柠檬酸盐 阴性 赖氨酸脱羧酶 阴性 鸟氨酸脱羧酶 a 尿素酶 阴性 KCN生长 阴性 注：a为除宋内氏菌和鲍氏13型为阳性，其余为阴性。 结果报告 能与某种志贺氏菌抗血清发生凝集且生化反应相符则报告该批样本中检出志贺氏菌 5 阳性结果处置 判断为阳性结果的分离株应由有资质的相关实验室确认阳性结果确认后应及时上报主管部门。 6 血清学分型（根据需要） 判定为志贺氏菌的培养物，根据需要进行志贺氏菌血清型分型，志贺氏菌属内四个群的血清型见表2。 先用群多价血清分群，再用群因子血清分型，福氏志贺氏菌分型还需要使用型特异血清。具体方法按志 贺氏菌诊断血清使用说明书进行。 表2 志贺氏菌属内四个群的血清型 志贺氏菌属 群抗原 血清型 痢疾志贺氏菌 A 1,2,3.4,5,6,7,8,9,10.11.12,13 福氏志贺氏菌 B la,1b,2a,2b,3a,3b,3c.4a,4b,5a,5b,6,X,Y 鲍氏志贺氏菌 c 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16.17,18 宋内氏志贺氏菌 D 1 2