SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2852—2011 大蒜黑腐病菌检疫鉴定方法 Inspection and identification of Embellisia allii (Campanile)Simmons 行业标准信息服务平台 2011-02-25发布 2011-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2852—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国安徽出人境检验检疫 局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：王英超、姚剑、封立平、魏晓棠、严进、吴兴海、余冬冬、纪瑛、张萍。 行业标准信息服务平台 SN/T 2852—2011 大蒜黑腐病菌检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了进出境植物检疫中大蒜黑腐病菌检疫鉴定方法 本标准适用于进出口大蒜、洋葱以及其他葱属中大蒜黑腐病菌的检疫和鉴定。 2原理 2.1分类学地位 大蒜黑腐病菌[Embellisiaallii（Campanile）Simmons］属半知菌亚门（Deuteromycotina），丝孢纲 （Hyphomycetes），丝孢目（Hyphomycetales），暗色孢科（Dematiaceae），埃里砖格孢属（Embellisia）。 2.2鉴定依据 大蒜黑腐病菌的形态特征、生物学特性、寄主范围（参见附录A）等是该病菌检疫鉴定方法的依据。 3仪器 3.1生物显微镜（具油镜镜头）、具透射光源的体视显微镜（最大放大倍数不低于50X）。 3.2超净工作台。 行业标准信息服务平台 3.3电子天平。 3.4光照恒温培养箱。 3.5高压灭菌器。 3.6医用注射器（10mL）及针头（18号） 3.7血球计数器。 4 药品试剂与培养基 4.1蒸馏水。 4.2次氯酸钠或乙醇。 4.3PDA培养基。 5现场检疫 5.1直观检查 重点检查是否有腐烂、黑色霉状物等病害症状。 5.2症状检查 对百合科葱属，尤其是大蒜或洋葱，注意检查蒜瓣或洋葱上是否有形状不规则的黑色凹陷病斑，病 斑表面是否有稀疏黑色霉状物，病斑下的组织是否变黑腐，症状图参见附录B。 1 SN/T 2852—2011 6 实验室检验 6.1分生孢子的直接镜检观察 对于有形状不规则的黑色凹陷病斑，病斑表面有稀疏黑色霉状物等症状的大蒜或洋葱，直接挑取症 状上的霉状物镜检观察。 6.2病菌的分离和纯化 对于症状不明显的葱属植物组织，选取可疑病瓣，用1%次氯酸钠或75%乙醇表面消毒，用无菌手 术解剖刀在患病蒜瓣病健交界处挑取2mm²×2mm²病健交界组织若干块，将组织置于无菌平皿中， 每平板接种5点，重复接种三块平板，25℃左右下培养5d～7d，获得纯培养。随后进行单孢分离，得 到单孢菌株，进行形态学鉴定。 6.3致病性测定 按照附录C的方法进行接种试验。 7鉴定特征 7.1培养特征 分离菌株在PDA培养基上形成灰黑色菌落，平铺，边缘整齐，气生菌丝不发达。 7.2分生孢子特征 分生孢子梗粗壮，屈膝状弯曲，有分枝，着生分生孢子的疤痕明显；分生孢子单生，黄褐色，多数椭圆 形或近圆柱形、正直，少数弯曲呈S形或Y形，具有暗褐色横隔4个～10个，纵隔或斜隔0个～2个，隔 膜较厚。孢子大小为24um～56um×10um~17um，表面光滑或微粗糙。分生孢子图参见附录D。 7.3致病性测定 用分离菌株接种蒜瓣。无伤接种和致伤接种均能致病·表现相同的症状。病菌自大蒜底部的茎盘 侵入，蒜瓣基部首先显症。致伤接种的蒜瓣在接种2d后即出现浅黄褐色水浸状病斑，4d后病斑变黑 色。此后病斑变黑部分向蒜瓣顶部扩展，表面出现霉状物，蒜肉组织黑腐，腐烂部分逐渐深人。最后整 个蒜瓣干缩直至消失始尽。无伤接种的蒜瓣在接种3d后出现相同症状。 致病菌的再分离和鉴定：用接种发病的蒜瓣作常规病组织分离，获得的分离菌与原接种菌形态特征相同。 8 结果判定 如分生孢子特征、分离物的培养特征、致病性特征及再分离菌株的形状与第7章鉴定特征吻合，鉴 定为大蒜黑腐病菌。 9菌种保存 分离并最终鉴定为大蒜黑腐病菌的菌株应转接到试管斜面上，置于4℃左右冰箱中保存，并定期 （120d～180d）转管，防止因斜面干燥而造成病原菌死亡。菌株至少需保存6个月。 2