ICS 65.100.01 CCS B 90 T/ZNZ 浙 江 省 农 产 品 质 量 安 全 学 会 团 体 标 准 T/ZNZ 137—2022 水果中三唑磷农药残留快速检测 胶体金免疫层析法 Rapid determination of triazophos pesticide residues in fruits — Colloidal gold immun ochromatography 2022 - 11 - 11发布 2022 - 12 - 11实施 浙江省农产品质量安全学会 发布 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 137—2022 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发 布机构不承担识别专利的责任。 本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。 本文件起草单位：绿城农科检测技术有限公司、北京京畿优智科技有限公司、浙江智云达检测技术 有限公司。 本文件主要起草人：徐子健、董振华、汪腊云、李文娟、何晓明、倪娟桢、张玉换、葛磊、陆雯、 李雅、王侃、黎斌、严可以。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 137—2022 1 水果中三唑磷农药残留快速检测 胶体金免疫层析法 1 范围 本文件规定了柑、橘、橙、苹果和荔枝等水果中三唑磷残留的胶体金免疫层析快速检测方法。 本文件适用于柑、橘、橙、苹果和荔枝等水果中三唑磷残留的快速检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的三唑磷经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合， 抑 制了抗体和试纸条中检测线（ T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过比较检测线 与质控线（ C线）颜色深浅，对样品中三唑磷 进行定性判定。 4 试剂与材料 除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。 4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8)。 4.1.2 提取液：由胶体金免疫层析试纸条配套提供，或按照其说明书配制。 4.2 参考物质 三唑磷（ triazophos ）参考物质的中文名称、英文名称、 CAS登录号、分子式、相对分子质量见表 1，纯度≥ 98.95%。 表1 三唑磷参考物质的中文名称、英文名称、 CAS登录号、分子式、相对分子质量 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 三唑磷 triazophos 24017-47-8 C12H16N3O3PS 313.3125 4.3 标准溶液配制 4.3.1 三唑磷标准储备液（ 400 mg/L ）：准确称取约 10 mg（精确至 0.1 mg）三唑磷（ 4.1.1）标准品 于25 mL烧杯中，加入约 10 mL乙腈（4.1.1）溶解，转移至 25 mL容量瓶中，用乙腈（ 4.1.1）定容至 刻度，摇匀，得三唑磷标准储备液（ 400 mg/L ），避光 -18℃及以下条件保存，有效期 1年。 4.3.2 三唑磷标准工作液（ 4 mg/L）：移取三唑磷储备液（ 400 mg/L ）（4.2.1）0.25 mL至25 mL容 量瓶中，用乙腈（ 4.1.1）定容至刻度，摇匀，得三唑磷标准工作液（ 4 mg/L），现用现配。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 137—2022 2 4.4 材料 三唑磷免疫胶体金快速检测试剂盒，按产品要求保存，在保质期内使用。不同品牌试剂盒可能有不 同保存条件。 5 仪器设备 5.1 电子天平：感量 0.01 g和0.01 mg。 5.2 组织捣碎机。 5.3 移液器： 10 μL～100 μL，100 μL～1000 μL，5 mL～10 mL。 5.4 计时器。 5.5 便携式读数仪：测量波长 525 nm。 6 试样制备 6.1 试样制备 样品测定部位按照 GB 2763中附录A的规定执行， 水果取可食部分， 用干净纱布擦去样品 表面附着物、 去除老皮、明显腐烂和萎蔫的部分茎叶、去除果梗、去蒂等。采用对角线分割法，取对角部分，于清洁 的无色聚乙烯塑料薄膜上，将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆， 制成待测液，取 500 g左右放入封装容器中，备用。 6.2 提取 称取1g（精确至 0.01 g）试样于 15 mL或50 mL离心管中，加入 8 mL提取液（ 4.1.3），上下振荡 1 min， 静置3 min，上清液即为样品待测液。 6.3 测定 从试剂盒（ 4.3）中取出相应胶体金免疫快速检测卡，恢复至室温，置于水平台面上。吸取 6.3中样 品待测液 100 μL垂直滴加至三唑磷免疫胶体金快速检测卡的金标微孔中，室温孵育 2 min，将微孔中液 体抽吸至微孔中固体全部溶解。 吸取微孔中全部液体至三唑磷免疫胶体金快速检测卡加样孔中，液体流动时开始计时，室温反应 5 min，根据判定标准判定结果，其他时间判定无效。 注1：测定步骤建议按照试纸条说明书。 注2：结果判定建议使用读数仪，读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。 7 质控保证和控制 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验 。 7.1 空白试验 称取同类基质空白试样，按 6.2和6.3步骤与样品同法操作。 7.2 加标质控试验 在空白试样中加入检出限浓度（ 0.2 mg/kg ）的三唑磷标准工作液（ 4.2.2），其余按照步骤 6操作。 8 结果判定 8.1 读数仪测定 8.1.1 如果使用读数仪进行结果判定，应于反应完成 5 min内读取结果。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 137—2022 3 8.1.2 读数仪的使用参照使用说明书。 8.1.3 阴性结果 R≥1.0，阳性结果 R＜1.0。R为检测线峰面积与控制线峰面积的比值。 8.2 目视判定 8.2.1 失效与无效 控制线（ C线）不出现红色条带，则检测检测卡失效，不能进行检测。 空白对照控制线（ C线）和检测线（ T线）均出现红色条带，而且 T线比C线颜色深或一样深，则检测 检测有效，可进行检测。 8.2.2 阴性结果（ -） 试样检测线（ T线）出现红色条带，且颜色比控制线（ C线）深或一样深为阴性。结果表述：阴性。 8.2.3 阳性结果（ +） 试样检测线（ T线）出现红色条带，但颜色比控制线（ C线）浅或检测线（ T线）未出现红色条带， 为阳性。结果表述：阳性。 图1 目视判定示意图 8.3 质控试验要求 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验 。空白试验样品检测结果应为阴性，加标质控试验样 品检测结果应为阳性。 9 结果确认 当检测结果为阳性时，需进行重新检测。若重复检测结果仍为阳性，应按照 GB 2763指定方法标准 进行确证。 10 性能指标 试剂盒验证要求每种基质的空白和添加浓度样品不得少于 20例，至少涵盖 5种农产品基质。由此， 每种基质出现 1例假阴/阳性样品，推算方法的灵敏度、假阳性率、假阴性率、特异性和准确率符合以下 指标。 10.1 检出限： 0.2 mg/kg 。 10.2 灵敏度：≥ 95%，计算方法参见附录 A。 10.3 特异性：≥ 90%，计算方法参见附录 A。 10.4 假阴性率：≤ 5%，计算方法参见附录 A。 10.5 假阳性率：≤ 10%，计算方法参见附录 A。 10.6 相对准确率：≥ 95%，计算方法参见附录 A。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 137—2022 4 11 其他 本方法所述试剂、试剂盒信息及操作流程是为给方法使用者提供方便，在使 用本方法时不做限定。 方法使用者使用的试剂、试剂盒应经过验证，满足本方法规定的各项性能指标，严格按照说明书要求规 范操作。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 137—2022 5 附 录 A （规范性） 快速检测方法性能指标计算方法 A.1 性能指标计算方法 表A.1性能指标计算方法 样品情况a 检测结果b 总数 阳性 阴性 阳性 N11 N12 N1.=N11+N12 阴性 N21 N22 N2.=N21+N22 总数 N.1=N11+N21 N.2=N12+N22 N=N1.+N2.或N.1+N.2 显著性差异（χ2） χ2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21） ，自由度（ df）=1 灵敏度（ p+，%） p+=N 11/N1. 特异性（ p-，%） p-=N22/N2. 假阴性率（ pf-，%） pf-=N12/N1.=100-灵敏度 假阳性率（ pf+，%） pf+=N 21/N2.=100-特异性 相对准确度， %c （N11+N22）/(N1.+N2.) a