ICS 07. 100. 30 SN CCS X 04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5368.1—2022 商品化试剂盒检测方法 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）方法一 Commercial Kit Detection Method-Cronobacter spp. (Enterobacter sakazaki)- Test method I 2022-03-14发布 2022-10-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T 5368.1—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是SN/T5368《商品化试剂盒检测方法 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）》的第1部分。 SN/T5368已经发布了以下部分： 商品化试剂盒检测方法克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）方法一 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 海关、中华人民共和国拱北海关、中华人民共和国深圳海关。 本文件主要起草人：曾静、张西萌、张琳、徐蕾蕊、马丹、郑晶、冯家望、吕敬章 1 SN/T5368.1—2022 商品化试剂盒检测方法 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）方法一 1范围 本文件规定了食品中克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）的环介导恒温核酸扩增（loop-mediatedisother- malamplification,LAMP)检测方法。 本文件适用于食品中克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）的检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB 4789.40 食品安全国家标准食品微生物学检验 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 商品化食品检测试剂盒评价方法 SN/T 2775 SN/T3266食品微生物检验方法确认技术规范 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 4 生物安全措施 为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测克罗诺杆菌属（阪崎肠杆 菌）。所有培养物、DNA提取物和废弃物应按照GB19489和GB/T27403中的有关规定执行。 5技术概要 应用环介导恒温核酸扩增（LAMP)技术进行克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）的筛选检测。根据克罗诺 杆菌属（阪崎肠杆菌）特有靶序列上的6个独立区域，采用6条特异引物通过稳定的BstDNA聚合酶来 驱动扩增反应，在6O℃左右完成恒温扩增。在环介导恒温核酸扩增反应中，焦磷酸盐（PPi)通过ATP 硫酸化酶被转化成三磷酸腺苷（ATP）。荧光素酶利用ATP发光，实现实时检测。 6 试剂与材料 6.13MMDS克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）分子检测试剂盒，本试剂盒参考SN/T2775和SN/T3266 由国家认证认可监督管理委员会商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见 SN/T 5368.1—2022 附录A。试剂盒组成如下： a) 裂解溶液（透明管中的粉红溶液LS管）； b) 扩增试剂管（含有冻干试剂小球，橙红色试管）； 阳性对照(RC)； c) d) 盖子（橙红色盖）。 注：如商品化试剂盒关键技术指标发生变动时，以试剂盒说明书操作为准。 6.2克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）质控菌株：ATCC29544。 6.3 缓冲蛋白陈水（BPW)培养基：按照附录B。 6. 4 3%84消毒液。 7 仪器和设备 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱：36℃±1℃； a) b) 天平：感量0.1g； c) 无菌锥形瓶：2000mL； d) 移液器：量程10μL~100μL； e) 加热模块：100℃±1℃； f) 3M分子检测仪； g) 计时器。 检测程序 出版文本为准 2