SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4675.12—2016 出口葡萄酒中溶菌酶的测定 液相色谱法 Determination of lysozyme in wine for exportHPLC method 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4675.12—2016 前言 SN/T4675《出口葡萄酒质量安全分析方法》共分为30个部分： SN/T4675.1：出口葡萄酒中甘油的测定酶法； SN/T4675.2：出口葡萄酒中2，3-丁二醇的测定 气相色谱法； SN/T4675.3：出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定； SN/T4675.4：出口葡萄酒中乳酸的测定酶法； SN/T4675.5：出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法； SN/T4675.6：出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定； SN/T4675.7：出口葡萄酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法； SN/T4675.8：出口葡萄酒中5-羟甲基糖醛的测定液相色谱法； SN/T4675.9：出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法； SN/T4675.10：出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T4675.11：出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法； SN/T4675.12：出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法； SN/T4675.13：出口葡萄酒中2,4，6-三氯甲苯醚残留量的测定气相色谱-质谱法； SN/T4675.14：出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T4675.15：出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法； 葡萄酒中富马酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法； SN/T4675.17：出口葡萄酒中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法： SN/T4675.18：出口葡萄酒中二硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法； SN/T4675.19：出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定； SN/T4675.20：出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法； SN/T4675.21:出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法； SN/T4675.22:出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法； SN/T4675.23：出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法； SN/T4675.24：出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法； -SN/T4675.25：出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（L*a*b*）色空间法； SN/T4675.26：出口葡萄酒度的测定散射光法； SN/T4675.27：出口葡萄酒碱性灰分的测定； SN/T4675.28：出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数； SN/T4675.30：出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。 本部分为SN/T4675的第12部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本部分修改采用国际葡萄与葡萄酒组织（OIV）的OIV-MA-AS315-14《葡萄酒中溶菌酶的测定-液 相色谱法》。本部分在技术内容上与该方法一致，仅对OIV的方法OIV-MA-AS315-14的个别内容作 了编辑性修改，修改的主要内容为： 色谱条件的优化。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 1 SN/T4675.122016 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：庞世琦、刘青、潘丙珍、梁瑞婷、陈秀明、刘朝霞、李志勇、韩深、田玲、宦萍。 行业标准信息服务平台 Ⅱ SN/T4675.12—2016 出口葡萄酒中溶菌酶的测定 液相色谱法 1范围 SN/T4675的本部分规定了葡萄酒中溶菌酶含量的高效液相色谱测定方法 本部分适用于白葡萄酒和起泡葡萄酒中溶菌酶含量的测定。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 本方法只检测葡萄酒中具有酶活性的溶菌酶的含量，但与蛋白质中酶真实的活性无关 葡萄酒中的溶菌酶经反相苯基柱分离后，用高效液相色谱荧光检测器或紫外检测器测定，保留时间 定性，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水采用GB/T6682规定的一级水。 4.1乙腈（CzH.N）：色谱纯。 4.2 无水乙醇（CHO） 4.3 盐酸（HCL）。 4.4 酒石酸（CH,O）。 4.5 三氟乙酸（TFA）。 4.6 5%盐酸溶液：量取5mL盐酸，用水定容至100mL 4.7 酒石酸溶液：称取1.0g酒石酸（4.4），用100mL无水乙醇溶解，用水定容至1000mL。 4.8 溶菌酶标准物质（CAS：12650-88-3）。 4.9 溶菌酶标准储备液：准确称取适量的溶菌酶标准品（4.8），加适量酒石酸溶液（4.7）超声震荡使其充 分溶解并定容至刻度，配制成浓度为2uL的标准储备液，保存在0℃~4℃的冰箱中 4.10 溶菌酶标准工作溶液：分别准确量取溶菌酶标准储备溶液（4.9），用样品提取液稀释，配制成 5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、25.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L、60.0mg/L的标准工作溶液，现 配现用。 4.11微孔滤膜：0.22μm，水系。 5 仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：具有荧光检测器或紫外检测器。 1