SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4675.11—2016 出口葡萄酒中7种花色苷的测定 超高效液相色谱法 Determination of seven anthocyanins in wine for exportUltra high performance liquid chromatography method 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4675.11—2016 前言 SN/T4675《出口葡萄酒质量安全分析方法》共分为30个部分： SN/T 4675.1 出口葡萄酒中甘油的测定酶法； SN/T 4675.2 出口葡萄酒中2,3-丁二醇的测定气相色谱法； SN/T4675.3 出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定； -SN/T4675.4 出口葡萄酒中乳酸的测定酶法； SN/T4675.5 出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法； -SN/T4675.6 出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定； SN/T 4675.7 出口葡萄酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.8 出口葡萄酒中5-羟甲基糠醛的测定液相色谱法； SN/T4675.9 出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.10 出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.11 出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法； SN/T4675.12 出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法； SN/T 4675.13 出口葡萄酒中2，4，6-三氯甲苯醚残留量的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.14 出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.15 出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法； SN/T 4675.16 出口葡萄酒中 富马酸的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.17 出口葡萄酒 中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法； SN/T4675.18 出口葡萄酒 硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法； SN/T 4675.19 出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定； SN/T 4675.20 出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法： SN/T 4675.21 出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法； SN/T 4675.22 出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法； SN/T4675.23 出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法； SN/T4675.24 出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法； SN/T 4675.25 出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（L*a*b*）色空间法； SN/T 4675.26 出口葡萄酒浊度的测定散射光法； SN/T4675.27 出口葡萄酒碱性灰分的测定； SN/T 4675.28 出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数； SN/T4675.29 出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法； 出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。 SN/T4675.30 本部分为SN/T4675的第11部分 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：刘萤、韩深、关丽军、王玥、梁娜娜、别玮、槐硕、刘青、李志勇。 SN/T 4675.11—2016 出口葡萄酒中7种花色苷的测定 超高效液相色谱法 1范围 SN/T4675的本部分规定了葡萄酒中花翠素-3-O-葡萄糖苷、花青素-3-O-葡萄糖苷、甲基花翠素-3- O-葡萄糖苷、甲基花青素-3-O-葡萄糖苷、二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷、花翠素-3,5-O-双葡萄糖苷以及花 青素-3，5-O-双葡萄糖苷等7种花色苷的超高效液相色谱测定方法。 本部分适用于红葡萄酒、桃红葡萄酒、带色起泡葡萄酒中花色苷的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 样品中的花色苷直接采用超高效液相色谱分离和测定。采用甲酸-水溶液和甲酸-乙睛溶液作为流 动相进行梯度洗脱，在518nm波长条件下进行检测，外标法定量 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为色谱纯，水采用GB/T6682规定的一级水。 4.1 乙腈(CH,CN)。 甲酸(HCOOH)。 甲醇(CH,OH)。 4.42%甲酸-水溶液（体积比）：2mL甲酸溶解于100mL水中。 4.5不 花色苷标准物质：纯度≥95%，基本信息参见附录A。 4.6花色苷标准储备溶液：分别称取花色苷标准品（4.5)10mg（精确至0.1mg），用甲醇（4.3）溶解、定 容至10mL，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液。溶液转移至棕色玻璃瓶中后，于一20℃冰箱内避 光保存。 4.7混合标准中间溶液：取标准储备液适量（4.6），混合后用甲酸-水溶液（4.4）配制成500g/mL的混合 标准中间溶液，4℃下避光保存，备用。 （4.4）定容至刻度稀释成1g/mL、2g/mL5g/mL10g/mL.25g/mL、50g/ml及100g/mL浓度水 平的混合标准工作溶液，摇匀，使用前配制。 5仪器和设备 5.1超高效液相色谱仪：配有紫外或二极管阵列检测器。 1 SN/T 4675.11—2016 5.2色谱柱：五氟苯基类表面多孔微粒色谱柱（poroshe11120PFPl），柱长100mm，柱内径3mm，填 料粒径2.7m：或同等性能的色谱柱。 5.3分析天平：精度为0.1mg。 5.4具塞容量瓶：5mL,10mL。 5.5移液器：0.5μL~10μL,20μL~200μL100μL~1000μL。 5.6 涡旋振荡器。 5.7高速离心机：转速≥10000r/min。 5.8 3玻璃烧杯：250mL。 5.9 具塞塑料离心管：2mL。 6 测定步骤 6.1 样品处理 将葡萄酒样品摇匀。倒取约20mL样品于洁净的玻璃烧杯（5.8）中，再用移液器量取2mL样品至 具塞塑料离心管（5.9）中，于12000r/min离心120s。取出后，用微量取液器吸取清液约1mL于进样 小瓶中，待液相色谱分析。 起泡葡萄酒需预先脱气。将100mL试样倒人带排气塞的瓶中，在室温下使用水平振荡器或超声 波水浴脱气，直至无气泡逸出。 6.2测定 6.2.1 色谱条件 a) 流动相：A液，2%甲酸-水溶液（体积比）；B液，2%甲酸-乙溶液（体积比）。 b) 梯度洗脱：参见表1。 c) 流动相流速：0.4mL/min。 d) 柱温：40℃。 e) 进样体积：5。 f) 检测波长：518nm。 表1 梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 96 4 10 85 15 6.2.2色谱分析 根据设定的色谱条件（6.2.1），取花色苷系列混合标准工作溶液（4.8）及样品（6.1）等体积进样测定， 并绘制峰面积对应浓度含量的标准曲线。样品中待测物应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲 线范围，应对样品用2%甲酸-水溶液进行适当稀释后测定。花色苷的超高效液相色谱图参见附录B中 图B.1，参考保留时间参见附录B中表B.1。在相同试验条件下，样品与标准品工作溶液中待测物质的 1）给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则 可使用这些等效的产品。 2