SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4624.4—2016 入境环保用微生物菌剂检测方法 第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌 Methods for examination of import microbial blends in the environmental protection-Part 4:Acidithiobacillus ferrooxidans 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4624.4—2016 前言 SN/T4624《人境环保用微生物菌剂检测方法》共分为17部分： 第1部分：地衣芽孢杆菌； 第2部分：短小芽孢杆菌； 第3部分：巨大芽孢杆菌； 一第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌； 第5部分：β型溶血性链球菌； 第6部分：金黄色葡萄球菌； 第7部分：沙门氏菌； 第8部分：志贺氏菌； 第9部分：致泻大肠埃希氏菌； 第10部分：淡紫拟青霉； 第11部分：雅致小克银汉霉； 第12部分：哈茨木霉； 第13部分：黄孢原毛平革菌； 第14部分：焦曲霉； 第15部分：解淀粉芽孢杆菌； 第16部分：类产碱假单胞菌； 第17部分：恶臭假单胞菌。 本部分为SN/T4624的第4部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：王金玲、李靓、金雁、赵颖、贾琳、李瑶、王芳。 业标准信息服务平台 1 SN/T4624.4—2016 入境环保用微生物菌剂检测方法 第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌 1范围 SN/T4624的本部分规定了人境环保用微生物菌剂符合性检验嗜酸氧化亚铁硫杆菌的形态学鉴 定、生化鉴定、实时荧光PCR检测方法 本部分适用于人境环保用微生物菌剂符合性检验嗜酸氧化亚铁硫杆菌的检测和鉴定。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3分类地位 种名：Acidithiobacillus ferrooridans 分类地位：原核生物界、化能营养原核生物门、细菌纲、硫化细菌科、硫杆菌属 43 主要试剂和培养基 4.1 实验用水：应符合GB/T6682中一级水的规格 4.2 LEPTOSPIRILLUM液体培养基：见附录A中A.1。 业标准信息服务平台 4.3 硫代硫酸钠：见A.2。 4.4 葡萄糖：见A.3。 4.5 蔗糖：见A.4。 4.6 丙三醇：见A.5。 4.7 蛋白陈：见A.6。 4.8 LEPTOSPIRILLUM+葡萄糖：见A.7。 4.9 LEPTOSPIRILLUM+蛋白陈：见A.8。 4.10 磷酸二氢铵：见A.9。 4.11 硝酸钾：见A.10。 4.12 pH 1:见 A.11。 4.13 pH2:见A.12。 4.14 pH3:见 A.13。 4.15 TE缓冲液（pH8.0)：见A.14。 4.16 TBE.见A.15。 4.17 Taq DNA聚合酶。 4.18 细菌基因组DNA提取试剂盒。 1 SN/T 4624.4—2016 4.19 50XTAE缓冲液（pH8.5）：见A.16。 4.20 琼脂糖。 4.21 溴化乙锭。 4.22 DNA分子量标记：100bpDNAladder。 5 5主要仪器和设备 5.1电子天平（感量0.01g）。 5.2恒温培养箱：30℃±1℃。 恒温振荡培养箱：30℃±1℃。 5.3 恒温水浴锅。 5.4 台式冷冻离心机（最高转速15000r/min）。 5.5 实时荧光PCR仪。 5.6 微量移液器和灭菌吸头：10μL、20μL、200μL、1000μL。 5.7 高压灭菌锅。 5.8 PCR超净工作台。 5.9 电泳仪。 5.10 核酸/蛋白分析仪。 5.11 凝胶成像系统。 6 样品制备 150r/min条件下培养4d，直至锥形瓶中颜色变成红棕色， 形态学鉴定 淀做涂片进行革兰氏染色，镜检。菌体呈杆状，为革兰氏阴性。 8 生化鉴定 用1.5mL无菌水悬浮7.1中沉淀，取悬浮水溶液进行生化鉴定，每管100μL。在30℃士1℃、 150r/min条件下除硝酸钾培养5d外其余均培养3d，反应结果见表1 表1嗜酸氧化亚铁硫杆菌生化特征 鉴定项目 嗜酸氧化亚铁硫杆菌 硫代硫酸钠 葡萄糖 燕糖 丙三醇