SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4547—2017 代替SN/T1896—2007 商品化试剂盒检测方法 大肠菌群和大肠杆菌 方法一 Commercial kit methodColiforms and escherichia coli- Test method I 行业标准信息服务平台 2017-05-12发布 2017-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4547—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1896—2007《食品中大肠菌群和大肠杆菌快速计数法PetrifilmTM测试片法》。 与SN/T1896一2007相比，除编辑性修改外主要技术变化如下： 修改了标准的中英文名称； 一修改了附录A； 一增加了计算公式； 删除了第二法PetrifilmTM测试片MPN法。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、大连启元科 技发展有限公司。 本标准起草人：刘淑艳、颜怀玉、王刚、丁健、尹琪、蒋丹、孙晓飞、万超、吴斌、林长军、卢行安、 周振亚。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T1896—2007。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4547—2017 商品化试剂盒检测方法 大肠菌群和大肠杆菌方法一 1范围 本标准规定了食品中大肠杆菌/大肠菌群检验测试片（PetrifilmTME.coli/ColiformCountPlate）的 检测方法。 本标准适用于食品和原料中大肠菌群和大肠杆菌的计数， 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 3 生物安全措施 为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测。所有培养物和废弃物的 处理应按照GB19489有关规定执行。 4. 技术概要 大肠杆菌/大肠菌群检验测试片法是用一种预先制备的含有指示剂及冷水可溶性凝胶的培养基系 统进行微生物培养的方法。 大肠杆菌/大肠菌群测试片含有VRB(VioletRedBile)培养基和β-葡萄糖苷酸酶指示剂，大肠杆菌 产生的β-葡萄糖苷酸酶与培养基中的指示剂反应，显示为蓝色并带有气泡的特征菌落；大肠菌群细菌发 酵乳糖产酸产气，与pH指示剂反应显示为红色并带有气泡的特征菌落。 5 设备和材料 5.1恒温培养箱：36℃±1℃。 5.2 2电子天平：感量0.1g。 5.3 均质器（旋刀式或拍击式）或等效的设备。 5.4pH计或精密pH试纸。 测试片压板 5.6 放大镜或/和菌落计数器 6 培养基和试剂 6.1无菌生理盐水：见附录A的A.1。 1 SN/T 4547—2017 6.2磷酸盐缓冲液：见附录A的A.2。 6.31mol/LNaOH:见附录A的A.3。 6.41mol/LHCl:见附录A的A.4。 6.5大肠杆菌/大肠菌群测试片。 本标准使用的试剂盒由美国3M有限公司生产，参考SN/T2775—2011和SN/T3266—2012，由 国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见附录B。 测试片储存于2℃～8℃，有效期18个月。 7检测程序 检测程序见图1。 检样 25g（mL）样品+225mL稀释液 10倍梯度稀释 选取2个～3个适宜连续稀释度的样品匀液，各取1mL 分别加入大肠杆菌/大肠菌群测试片 36℃±1℃ 24h±2h或48h±2h 计数蓝色带气泡的菌落 计数蓝色带气泡和红色 带气泡的菌落 报告大肠杆菌数 报告大肠菌群数 图1大肠菌群和大肠杆菌测试片计数法检测程序 准信息 8操作步骤 8.1样品制备 8.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯中， 8000r/min～10000r/min均质1min~2min，或放人盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌 均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。 8.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶 （瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。样品匀液的pH值应为 6.5～7.5，pH值过低或过高时可分别采用1mol/LNaOH调节或1mol/LHCI予以调节。 如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或2℃～5℃不超过18h解冻。 8.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲 液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成 2