ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T19684—2026 代替GB/T19684—2005 饲料中金霉素的测定 Determinationofchlortetracyclineinfeeds 2026-04-30发布 2026-11-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T19684—2005《饲料中金霉素的测定 高效液相色谱法》,与GB/T19684—2005 相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 更改了范围和检出限(见第1章,2005年版的第1章); b) 更改了原理(见4.1,2005年版的第3章); c) 更改了试验步骤(见4.5,2005年版的第7章); d) 更改了精密度(见4.7,2007年版的第9章); e) 增加了液相色谱-串联质谱法(见第5章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:中国农业大学、唐山市食品药品综合检验检测中心。 本文件主要起草人:杨文军、肖琎、田颖、郭亮、陈义强、郑百芹、李明阳、张振国、王琳、梁珊珊。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2005年首次发布为GB/T19684—2005; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T19684—2026饲料中金霉素的测定 1 范围 本文件描述了饲料中金霉素的高效液相色谱和液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料、混合型饲料添加剂和动物源性 饲料原料中金霉素的测定。 本文件高效液相色谱法配合饲料、动物源性饲料原料的检出限为2mg/kg、定量限为4mg/kg;浓 缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料、混合型饲料添加剂的检出限为5mg/kg、定量限为10mg/kg。 液相色谱-串联质谱法配合饲料、动物源性饲料原料的检出限为0.01mg/kg、定量限为0.05mg/kg;浓 缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料、混合型饲料添加剂的检出限为0.025mg/kg、定量限 为0.1mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 高效液相色谱法 4.1 原理 试样中的金霉素用Na2EDTA-Mcllvaine-甲醇溶液提取,高效液相色谱测定,外标法定量。 4.2 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 4.2.1 水:GB/T6682,一级。 4.2.2 甲醇:色谱纯。 4.2.3 乙腈:色谱纯。 4.2.4 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取4g氢氧化钠,用水溶解,转移至100mL容量瓶中,定容,混匀。 4.2.5 盐酸溶液(1mol/L):移取盐酸9mL于100mL容量瓶中,用水稀释、定容,混匀。 4.2.6 Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH=6):称取7.1g一水合柠檬酸、17.9g十二水合磷酸氢二 钠、37.2g二水合乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA·2H2O),用水溶解,转移至1000mL容量瓶中,定 容,混匀,用氢氧化钠溶液(4.2.4)或盐酸溶液(4.2.5)调至pH6。 1GB/T19684—20264.2.7 提取液:取Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(4.2.6)900mL,甲醇100mL,混匀。 4.2.8 草酸溶液(10mmol/L):称取1.26g二水合草酸,用水溶解,定容至1000mL,混匀。 4.2.9 标准储备溶液(1mg/mL):准确称取适量盐酸金霉素标准品(以金霉素计,精确至0.01mg。 CAS号:64-72-2,纯度≥98%)于10mL容量瓶中,用甲醇(4.2.2)溶解、定容,混匀。-18℃以下保 存,有效期6个月。 4.2.10 标准中间溶液(100μg/mL):准确移取1mL标准储备溶液(4.2.9),置于10mL容量瓶中,用甲 醇(4.2.2)稀释、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期7d。 4.2.11 标准系列溶液:准确移取标准中间溶液(4.2.10)适量,用提取液(4.2.7)稀释,配制成质量浓度分 别为0.4μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的标准系列溶液。临用现配。 4.2.12 微孔滤膜:0.45μm,水系。 4.3 仪器设备 4.3.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器。 4.3.2 分析天平:精度0.1mg、0.01mg。 4.3.3 离心机:转速不低于10000r/min。 4.3.4 pH计:精度±0.1。 4.3.5 涡旋混合器。 4.3.6 超声波清洗器。 4.4 样品 按照GB/T20195规定制备试样,至少200g,粉碎使其全部过0.425mm试验筛,混合均匀,装入密 闭容器中,备用。 4.5 试验步骤 4.5.1 提取 平行做两份试验。称取试样2g(配合饲料5g),精确至0.1mg,置于50mL离心管中,准确加入 20mL提取液(4.2.7),涡旋混匀后振荡10min,冰水浴低温超声提取10min,10000r/min离心 5min,取上清液于离心管中。残渣重复提取两次,每次15mL提取液(4.2.7),合并上清液(V),混匀,微 孔滤膜(4.2.12)过滤。滤液在12h内完成测定。 4.5.2 测定 4.5.2.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或性能相当者; b) 检测波长:375nm; c) 柱温:30℃; d) 流速:1.0mL/min; e) 进样量:20μL; f) 流动相:A相为草酸溶液(4.2.8),B相为乙腈(4.2.3)∶甲醇(4.2.2)=3∶2(体积比),梯度洗脱 程序见表1。 2GB/T19684—2026表1 梯度洗脱程序 时间/min A相(体积分数)/% B相(体积分数)/% 0 80 20 7 70 30 17 70 30 19 40 60 23 80 20 30 80 20 4.5.2.2 标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取标准系列溶液(4.2.11)和试样溶液(4.5.1)上机测定。金霉素标准溶 液色谱图见附录A。 4.5.2.3 定性 在相同试验条件下,试样溶液中金霉素的保留时间应与标准系列溶液(质量浓度相当)中金霉素的 保留时间一致,其相对偏差在±2.5%之内。 4.5.2.4 定量 以标准系列溶液中金霉素的质量浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,其相关系数 应不低于0.99。试样溶液(4.5.1)中金霉素的浓度应在标准曲线线性范围内。如超出范围,应将试样溶 液(4.5.1)用提取液(4.2.7)稀释后重新测定。单点校准定量时,试样溶液(4.5.1)中金霉素的质量浓度与 标准溶液质量浓度相差不超过30%。 4.6 试验数据处理 试样中金霉素的含量以质量分数w计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示。多点校准按式(1)计算; 单点校准按式(2)计算: w=ρ×V×1000 m×1000×f ……………………(1) 式中: ρ ———从标准曲线查得的试样溶液金霉素的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———提取溶液的总体积,单位为毫升(mL); 1000———单位换算系数; m———试样质量,单位为克(g); f———超出线性范围后试样溶液的稀释倍数。 w=A×ρs×V×1000 As×m×1000×f ……………………(2) 式中: A ———试样溶液中金霉素的峰面积; ρs———金霉素标准溶液质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); 3GB/T19684—2026V———提取溶液的总体积,单位为毫升(mL); 1000———单位换算系数; As———标准溶液中金霉素的峰面积; m———试样的质量,单位为克(g); f———稀释倍数。 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。 4.7 精密度 在重复性条件下,两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%。 5 液相色谱-串联质谱法 5.1 原理 试样中的金霉素用Na2EDTA-Mcllvaine溶液提取,经固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱测 定,基质匹配标准溶液校准,外标法定量。 5.2 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.2.1 水:GB/T6682,一级。 5.2.2 甲醇:色谱纯。 5.2.3 乙腈:色谱纯。 5.2.4 甲酸:色谱纯。 5.2.5 乙酸乙酯:色谱纯。 5.2.6 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取4g氢氧化钠,用水溶解,转移至100mL容量瓶中,定容,混匀。 5.2.7 盐酸溶液(1mol/L):移取盐酸9mL于100mL容量瓶中,用水稀释、定容,混匀。 5.2.8 Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH=6):称取7.1g一水合柠檬酸、17.9g十二水合磷酸氢二 钠、37.2g二水合乙二胺四乙酸二钠(Na2ED