ICS65.150 CCSB50 中华人民共和国国家标准 GB/T18654.13—2026 代替GB/T18654.13—2008 鱼类种质检验 第13部分:同工酶电泳分析 Inspectionofgermplasmforfishes— Part13:Testmethodofisozymeelectrophoresis 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是GB/T18654《鱼类种质检验》的第13部分。GB/T18654已经发布了以下部分: ———第1部分:检验规则; ———第2部分:抽样方法; ———第3部分:性状测定; ———第4部分:年龄与生长的测定; ———第5部分:食性分析; ———第6部分:繁殖性能的测定; ———第7部分:生态特性分析; ———第8部分:耗氧率与临界窒息点的测定; ———第9部分:含肉率测定; ———第10部分:肌肉营养成分的测定; ———第12部分:染色体组型分析; ———第13部分:同工酶电泳分析; ———第14部分:DNA含量的测定。 本文件代替GB/T18654.13—2008《养殖鱼类种质检验 第13部分:同工酶电泳分析》,与 GB/T18654.13—2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 更改了原理(见第4章,2008年版的第3章); b) 更改了试剂与材料(见第5章,2008年版的第4章); c) 更改了仪器设备(见第6章,2008年版的第5章); d) 更改了抽样(见第7章,2008年版的第6章); e) 更改了试验步骤和数据处理(见第8章和第9章,2008年版的第7章); f) 删除了结果判定(见2008年版的第8章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。 本文件起草单位:上海海洋大学、中国水产科学研究院长江水产研究所、中国水产科学研究院东海 水产研究所、云南省渔业科学研究院、中国水产科学研究院黑龙江水产研究所。 本文件主要起草人:赵金良、唐首杰、赵岩、刘永涛、周剑光、张林、张涛、周瑞琼、李燕、么宗利、 来琦芳、缪祥军、李大田、范鹏、孙云超。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2008年首次发布为GB/T18654.13—2008; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T18654.13—2026 引 言 水产种质资源是渔业生产活动重要的物质基础。《养殖鱼类种质检验》分部分标准是鱼类种质检测 的基础性通用标准。标准实施以来,在鱼类资源调查、保护、增殖、利用等活动中发挥了重要作用。为更 好地服务于渔业发展和检测需求,将《养殖鱼类种质检验》名称更改为《鱼类种质检验》,对标准的部分内 容进行了修订。 GB/T18654拟由以下部分构成。 ———第1部分:检验规则。目的在于描述鱼类种质检验分类、检验项目、判定规则和复检规则。 ———第2部分:抽样方法。目的在于描述鱼类种质检验抽样的试剂与器械用品、抽样规则、取样程 序、样本量和样本保存。 ———第3部分:性状测定。目的在于描述鱼类性状测定的试剂与材料、仪器设备、样品制备和试验 步骤、数据处理。 ———第4部分:年龄与生长的测定。目的在于描述鱼类年龄与生长测定的试剂与材料、仪器设备、 样品、试验步骤和数据处理。 ———第5部分:食性分析。目的在于描述鱼类食性分析的试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤和 数据处理。 ———第6部分:繁殖性能的测定。目的在于描述鱼类怀卵量、产卵量测定的试剂与材料、仪器设备、 样品、试验步骤和数据处理。 ———第7部分:生态特性分析。目的在于描述鱼类生态特性(温度、盐度耐受性)分析的试剂、仪器 设备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第8部分:耗氧率与临界窒息点的测定。目的在于描述鱼类耗氧率与临界窒息点测定的试剂 与材料、仪器设备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第9部分:含肉率测定。目的在于描述鱼类含肉率测定的试剂与材料、仪器设备、样品、试验步 骤和数据处理。 ———第10部分:肌肉营养成分的测定。目的在于描述鱼类肌肉营养成分(水分、灰分、蛋白质、氨基 酸、脂肪及脂肪酸)测定的试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第12部分:染色体组型分析。目的在于描述鱼类染色体组型分析的原理、试剂与材料、仪器设 备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第13部分:同工酶电泳分析。目的在于描述鱼类同工酶电泳分析的试剂与材料、仪器设备、样 品、试验步骤和数据处理。 ———第14部分:DNA含量的测定。目的在于描述鱼类DNA含量测定的试剂与材料、仪器设备、 样品、试验步骤和数据处理。 ⅡGB/T18654.13—2026 鱼类种质检验 第13部分:同工酶电泳分析 1 范围 本文件描述了鱼类同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳分析的原理、试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤 和数据处理。 本文件适用于鱼类同工酶电泳分析。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18654.2 鱼类种质检验 第2部分:抽样方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 同工酶(isoenzyme)是鱼体内催化相同反应,而分子结构、理化性质不同的一组酶。根据其所带电 荷、分子质量、结构的不同,在电场作用下,同工酶组分在聚丙烯酰胺凝胶介质中出现不同的迁移特 征,经催化反应与染色,呈现不同数目的酶带,作为鱼类种质的生化遗传特征。 5 试剂与材料 警示———丙烯酰胺、N,N'-亚甲基双丙烯酰胺或甲叉双丙烯酰胺、四甲基乙二胺、吩嗪甲酯硫酸盐、 氯化硝基四氮唑蓝、α-乙酸萘酯和β-乙酸萘酯为有毒化学品,使用时应采取呼吸道和皮肤的防护措 施,用后洗手。 除另有规定外,所有试剂均为分析纯。试验用水为符合GB/T6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 冰乙酸(CH3COOH)。 5.1.2 乙醇(CH3CH2OH)。 5.1.3 甘油(C3H8O3)。 5.1.4 氢氧化钠(NaOH)。 5.1.5 氯化硝基四氮唑蓝(NBT):4℃保存。 1GB/T18654.13—2026 5.1.6 三羟甲基氨基甲烷(Tris)。 5.1.7 柠檬酸(C6H8O7)。 5.1.8 乙二胺四乙酸(EDTA)。 5.1.9 硼酸(H3BO3)。 5.1.10 L-组氨酸(C6H9N3O2)。 5.1.11 丙烯酰胺(Arc)。 5.1.12 N,N'-亚甲基双丙烯酰胺或甲叉双丙烯酰胺(Bis)。 5.1.13 四甲基乙二胺(TEMED)。 5.1.14 过硫酸铵(AP)。 5.1.15 盐酸(HCl)。 5.1.16 二水合磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)。 5.1.17 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 5.1.18 甘氨酸(C2H5NO2)。 5.1.19 乳酸钠(C3H5O3Na)。 5.1.20 DL-苹果酸(C4H6O5)。 5.1.21 α-磷酸甘油钠(C3H7Na2O6P·6H2O)。 5.1.22 辅酶Ⅰ(NAD):4℃保存。 5.1.23 辅酶Ⅱ(NADP):4℃保存。 5.1.24 吩嗪甲酯硫酸盐(PMS):4℃保存。 5.1.25 山梨醇(C6H14O6):4℃保存。 5.1.26 DL-异柠檬酸三钠(C6H5O7Na3):4℃保存。 5.1.27 6-磷酸葡萄糖酸钠(C18H36Na3O30P3):4℃保存。 5.1.28 α-乙酸萘酯(CH3CO2C10H7):4℃保存。 5.1.29 β-乙酸萘酯(C12H10O2):4℃保存。 5.1.30 坚牢蓝RR盐(C15H16N2O3)。 5.2 溶液配制 5.2.1 2.5%冰乙酸:量取2.5mL冰乙酸(5.1.1),加入97.5mL水,混合均匀。 5.2.2 固定液:3份乙醇(5.1.2),加1份冰乙酸(5.1.1),加1份甘油(5.1.3),加5份水,混合均匀。 5.2.3 5%氢氧化钠溶液:称取5g氢氧化钠(5.1.4),用水定容至100mL。 5.2.4 1mg/mL氯化硝基四氮唑蓝溶液:称取100mg氯化硝基四氮唑蓝(5.1.5),用水定容至 100mL。 5.2.5 TC制胶缓冲液:称取3.0285g三羟甲基氨基甲烷(5.1.6),用柠檬酸(5.1.7)调至pH8.0,用水 定容至1L。 5.2.6 EBT制胶缓冲液:称取5.4513g三羟甲基氨基甲烷(5.1.6),0.2922g乙二胺四乙酸(5.1.8),用 硼酸(5.1.9)调至pH8.6,用水定容至1L。 5.2.7 HC制胶缓冲液:称取1.9395g组氨酸(5.1.10),21.014g柠檬酸(5.1.7),用5%氢氧化钠溶液 (5.2.3)调至pH8.2,用水定容至1L。 5.2.8 TC电极缓冲液:称取4.865g三羟甲基氨基甲烷(5.1.6),用柠檬酸(5.1.7)调至pH8.0,用水定 容至1L。 5.2.9 EBT电极缓冲液:称取65.4g三羟甲基氨基甲烷(5.1.6),3.51g乙二胺四乙酸(5.1.8),用硼酸 (