ICS65.020.01 CCSB16 中华人民共和国国家标准 GB/T18085—2026 代替GB/T18085—2000 小麦矮腥黑穗病菌检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofTilletiacontroversaJ.G.Kühn 2026-04-30发布 2026-11-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T18085—2000《植物检疫 小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法》,与GB/T18085— 2000相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 增加了检疫流程图(见第6章); b) 删除了现场检疫(见2000年版的第6章); c) 增加了扫描电子显微镜鉴定方法(见10.1.3)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本文件起草单位:中国农业科学院植物保护研究所、全国农业技术推广服务中心、深圳海关动植物 检验检疫技术中心。 本文件主要起草人:高利、冯晓东、陈冉冉、陈万权、马晨、王晓亮、姜培、刘太国、高瑞芳。 本文件于2000年首次发布,本次为第一次修订。 ⅠGB/T18085—2026小麦矮腥黑穗病菌检疫鉴定方法 1 范围 本文件描述了小麦矮腥黑穗病菌(TilletiacontroversaJ.G.Kühn)的检疫鉴定方法。 本文件适用于小麦矮腥黑穗病菌的检疫和鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 基本信息 中文名:小麦矮腥黑穗病菌。 学名:TilletiacontroversaJ.G.Kühn。 分类地位:真菌界(Fungi),担子菌门(Basidiomycota),黑粉菌亚门(Ustilaginomycotina),外担菌纲 (Exobasidiomycetes),腥黑粉菌目(Tilletiales),腥黑粉菌科(Tilletiaceae),腥黑粉菌属(Tilletia)。 寄主、分布等信息见附录A。 5 鉴定原理 5.1 判断依据 该病原菌冬孢子形态学特征、自发荧光显微学特征和萌发生理学特征与其他腥黑粉病菌不同,是鉴 定该病原菌的判断依据。 5.2 冬孢子形态特征 冬孢子为星球形、椭圆形或不规则形,具网状饰纹和无色到淡色的胶质鞘,直径(含胶质鞘)为 16.80μm~32.19μm,通常为18μm~24μm;冬孢子萌发适宜温度为2℃~8℃。萌发时形成先菌丝 (担子),在其顶端产生初生小孢子(担孢子),初生小孢子经“H”形交配后产生新月形次生小孢子。 网脊高度值是小麦矮腥黑穗病菌和其近似种———小麦网腥黑穗病菌(TilletiacariesTul.)冬孢子 最重要的区别特征,前者的网脊高度值(平均值±标准差)为1.43μm±0.14μm,后者为0.53μm± 0.19μm。当某个冬孢子的网脊高度值大于临界网脊高度指数值0.95μm时,视为小麦矮腥黑穗病菌冬 孢子,小于或等于0.95μm时,视为小麦网腥黑穗病菌冬孢子。 5.3 冬孢子自发荧光显微学特征 在激发滤光片485nm、屏障滤光片520nm的激发下,小麦矮腥黑穗病菌冬孢子在3min内可产生 1GB/T18085—2026自发荧光,其近似种小麦网腥黑穗病菌则不具备该特征。 5.4 冬孢子萌发生理学特征 小麦矮腥黑穗病菌冬孢子在5℃萌发、17℃不能萌发,而小麦网腥黑穗病菌冬孢子在5℃和17℃ 均可萌发。 6 检疫鉴定流程 检疫鉴定流程见图1。 图1 检疫鉴定流程图 2GB/T18085—20267 仪器和用具 7.1 显微镜(具落射汞灯装置、摄像转换器及监视器)。 7.2 扫描电子显微镜。 7.3 滤光片组(450nm~490nm激发,520nm屏障)。 7.4 目镜和镜台测微尺。 7.5 往复式振荡器。 7.6 低速离心机。 7.7 干热灭菌器。 7.8 高压灭菌器。 7.9 普通天平(感量0.001g)。 7.10 超净工作台。 7.11 生物培养箱(具光照,低温可调至5℃)。 7.12 可调微量加样器(5μL~200μL)。 7.13 三角烧瓶(250mL)。 7.14 刻度离心管(1.5mL、10mL、20mL及100mL)。 7.15 培养皿(直径9cm)。 7.16 载玻片(长×宽为25.4mm×76.2mm,厚0.8mm)。 7.17 盖玻片(18mm×18mm)。 7.18 孔筛(长孔筛直径20cm,孔径1.7mm×20mm;圆孔筛直径20cm,孔径2.5mm)。 7.19 封口膜或铝箔纸。 7.20 台式离心机。 8 试剂 除非另作说明,以下药剂的纯度均为化学纯。 8.1 次氯酸钠溶液或漂白粉精片。 8.2 吐温-20(Tween-20)。 8.3 席尔氏浮载剂(可参考附录B的方法自行配制)。 8.4 乙酸钾。 8.5 甘油。 8.6 乙醇。 8.7 柠檬酸。 8.8 甲醇。 8.9 磷酸氢二钠。 8.10 青霉素、链霉素(医用注射粉剂)。 8.11 琼脂粉。 8.12 无荧光显微镜物镜镜头油(折射率=1.516)。 8.13 永久封片剂。 3GB/T18085—20269 试验步骤 9.1 称样 称取混匀后的50g样品作为试验样品。 9.2 菌瘿检查 如发现腥黑穗病菌菌瘿,刮取少许冬孢子粉加适量席尔氏液镜检,作初步检查。如怀疑是小麦矮腥 黑穗病菌,随机测量30个成熟冬孢子的网脊高度值。 9.3 冬孢子检查 9.3.1 洗涤和离心 9.3.1.1 加水 将试验样品倒入经干热灭菌(165℃,1.5h)或湿热灭菌(121℃,20min)后的250mL三角烧瓶 内,加蒸馏水100mL,再加表面活性剂吐温-20试剂1滴~2滴。 9.3.1.2 封口 用铝箔纸或封口膜将三角烧瓶封口。 9.3.1.3 振动洗涤 将三角烧瓶放在往复式振荡器上振荡洗涤5min。 9.3.1.4 离心 立即取下三角烧瓶,将洗涤悬浮液注入经干热灭菌的10mL~20mL刻度离心管内,1000r/min,离 心3min。 9.3.1.5 混合离心 取出离心管,倾去上清液,再加剩余洗涤悬浮液,混合离心,直至所有洗涤悬浮液离心完毕,留沉 淀物。 9.3.2 定容 在沉淀物中加入席尔氏浮载剂使之悬浮,视沉淀物多少定容至1mL~3mL。 9.3.3 制片 用可调微量加样器吸取5μL~20μL沉淀物悬浮液至载玻片上,加盖玻片。制片用沉淀物悬浮液 的体积以加盖玻片后悬浮液不外溢为宜。 9.3.4 镜检 每份试验样品的沉淀物悬浮液至少镜检5张玻片,每片按视野依次全部检查。 9.3.5 测量 如发现可疑小麦矮腥黑穗病菌冬孢子,随机测量30个成熟冬孢子的网脊高度值。如测量5张玻片 4GB/T18085—2026