2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 海 藻 及 其 制 品 中 岩 藻 黄 素 含 量 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 2 0 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 7 . 0 5 0 C C S X 3 0 6 6 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f f u c o x a n t h i n i n s e a w e e d a n d i t s p r o d u c t s — H i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y S C ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布SC/T３０６６—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出. 本文件由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会(SAC/TC１５６/SC３)归口. 本文件起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所、山东省海洋资源与环境研究院、山东洁晶集 团股份有限公司、山东海之宝海洋科技有限公司、青岛聚大洋藻业集团有限公司、中国海洋大学、中国水产 科学研究院南海水产研究所. 本文件主要起草人:徐英江、朱文嘉、韩典峰、孙伟红、孙琰晴、赵丽、刘小静、曹体宏、丁玉竹、李振兴、 刘晓勇、吴仕鹏、秦绪娟、张波、程跃谟、崔庆奎、赵永强、周全利、龙晓珊、姜芳、李佳蔚. ⅠSC/T３０６６—２０２５ 海藻及其制品中岩藻黄素含量的测定 高效液相色谱法 １　范围 本文件描述了用高效液相色谱法测定海藻及其制品中岩藻黄素含量的原理,试剂和材料,仪器设备, 样品的制备与保存,测定步骤,数据处理,方法灵敏度、准确度和精密度. 本文件适用于鲜海藻、盐渍海藻、即食海藻、干海藻及岩藻黄素粉中岩藻黄素含量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样中岩藻黄素经乙醇溶液提取,采用高效液相色谱紫外检测器测定,外标法定量. ５　试剂和材料 除另有说明,所有试剂均为分析纯,试验用水应符合GB/T６６８２一级水的规定. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　乙醇(CH３CH２OH). ５􀆰１􀆰２　乙腈(CH３CN):色谱纯. ５􀆰１􀆰３　丙酮(CH３COCH３):色谱纯. ５􀆰２　标准品 岩藻黄素标准品(C４２H５８O６,CAS号:３３５１Ｇ８６Ｇ８):纯度≥９８％. ５􀆰３　溶液配制 ５􀆰３􀆰１　７０％乙醇溶液:乙醇(５􀆰１􀆰１)∶水＝７∶３(体积比),混匀. ５􀆰３􀆰２　７８％乙腈溶液:乙腈(５􀆰１􀆰２)∶水＝７８∶２２(体积比),混匀. ５􀆰４　标准溶液配制 ５􀆰４􀆰１　岩藻黄素标准储备溶液(１０００μg/mL):称取１０mg(精确至０􀆰０１mg)岩藻黄素标准品(５􀆰２),用 丙酮(５􀆰１􀆰３)溶解并用棕色容量瓶定容至１０mL,避强光操作.－１８℃以下密封避光保存,有效期２个月. ５􀆰４􀆰２　岩藻黄素标准中间溶液(１００μg/mL):准确移取岩藻黄素标准储备溶液(５􀆰４􀆰１)１􀆰００mL,于 １０mL棕色容量瓶中,用７８％乙腈溶液(５􀆰３􀆰２)稀释并定容,４℃保存,有效期５d. ５􀆰４􀆰３　岩藻黄素标准工作液:准确移取适量标准中间溶液(５􀆰４􀆰２),用７８％乙腈溶液(５􀆰３􀆰２)配制成浓度 依次为０􀆰０５μg/mL、０􀆰１０μg/mL、０􀆰５０μg/mL、１􀆰００μg/mL、５􀆰００μg/mL和１０􀆰０μg/mL的系列标准溶 液,现用现配. ５􀆰５　材料 １SC/T３０６６—２０２５ 聚偏二氟乙烯微孔滤膜:０􀆰４５μm. ６　仪器设备 ６􀆰１　高效液相色谱仪:配紫外检测器. ６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g. ６􀆰３　电子天平:感量０􀆰００１g. ６􀆰４　匀浆机. ６􀆰５　高速组织粉碎机:转速不低于２５０００r/min. ６􀆰６　超声波发生器:６０kHz. ６􀆰７　旋涡混合器. ６􀆰８　离心机:转速不低于４０００r/min. ７　样品的制备与保存 ７􀆰１　湿基试样 取适量湿基试样(鲜海藻、盐渍海藻、即食鲜海藻),去除沙石、盐粒等杂质,剪或切成小块,用匀浆机均 质.制样过程中避强光. ７􀆰２　干基试样 取适量干基试样(干海藻、即食干海藻),剪或切成小块,放入高速组织粉碎机,应多次粉碎,至试样全 部通过８３０μm(２０目)筛;取适量岩藻黄素粉,过８３０μm(２０目)筛.制样过程中避强光. ７􀆰３　试样的保存 试样置于－１８℃以下密封避光保存,保存期不超过２个月. ８　测定步骤 ８􀆰１　提取 ８􀆰１􀆰１　湿基试样 ８􀆰１􀆰１􀆰１　称取湿基试样２􀆰０g(精确至０􀆰００１g)于５０mL离心试管中,加入２０mL７０％乙醇溶液 (５􀆰３􀆰１),涡旋振荡混匀. ８􀆰１􀆰１􀆰２　取上述涡旋混匀后溶液,超声提取３０min,４０００r/min离心１０min,将上层清液转移至５０mL 容量瓶中,残渣中加入２０mL７０％乙醇溶液(５􀆰３􀆰１),超声３０min,４０００r/min离心１０min,合并２次离 心的上清液,用７０％乙醇溶液(５􀆰３􀆰１)定容至５０mL.取１mL定容液过０􀆰４５μm微孔滤膜(５􀆰５),待测. 分析过程避强光. ８􀆰１􀆰２　干基试样 称取干基试样０􀆰５g(精确至０􀆰００１g)于５０mL离心试管中,加入２０mL７０％乙醇溶液(５􀆰３􀆰１),涡旋 振荡混匀,于避光处静置１６h,按８􀆰１􀆰１􀆰２中的操作进行. ８􀆰２　测定 ８􀆰２􀆰１　高效液相色谱参考条件 高效液相色谱仪的色谱参考条件如下: a)　色谱柱:C１８色谱柱(２５０mm×４􀆰６mm,５μm)或性能相当者; b)流速:１􀆰０mL/min; c)进样量:２０μL; d)柱温:３０℃; e)检测波长:４５０nm; f)流动相:A为乙腈,B为水,A∶B＝７８∶２２(体积比),等度洗脱. ２SC/T３０６６—２０２５ ８􀆰２􀆰２　色谱分析 ８􀆰２􀆰２􀆰１　标准曲线绘制 将标准工作液(５􀆰４􀆰３),按照８􀆰２􀆰１的色谱条件进行分析和测定.以岩藻黄素标准溶液浓度为横坐 标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线.岩藻黄素标准溶液的液相色谱图见附录A中的图A􀆰１. ８􀆰２􀆰２􀆰２　试样测定 按照８􀆰２􀆰１的色谱条件,对８􀆰１提取试样进行分析和测定,以保留时间定性(试样中岩藻黄素的保留 时间与标准品的保留时间偏差在±２􀆰５％以内),单点或标准曲线定量.加标试样的液相色谱图见图A􀆰２, 藻类样品液相色谱图见图A􀆰３~A􀆰５. ９　数据处理 试样中岩藻黄素的含量按公式(１)计算. X＝c×V×１０００ m×１０００(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: X———试样中岩藻黄素含量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg); c———待测液中岩藻黄素浓度的数值,单位为微克每毫升(μg/mL); V———待测液定容体积的数值,单位为毫升(mL); m———称取试样质量的数值,单位为克(g). 计算结果以重复性条件下获得的２次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留３位有效数字. １０　方法灵敏度、准确度和精密度 １０􀆰１　灵敏度 本方法的湿基试样中岩藻黄素含量的检出限为０􀆰７５０mg/kg,定量限为３􀆰００mg/kg;干基试样中岩 藻黄素含量的检出限为３􀆰００mg/kg,定量限为１２􀆰０mg/kg. １０􀆰２　准确度 本方法的湿基试样中添加浓度为３mg/kg~２１５mg/kg时,回收率为９０％~１１０％;干基试样添加浓 度为１２mg/kg~８５０mg/kg时,回收率为９０％~１１０％. １０􀆰３　精密度 在重复性条件下,获得的２次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的１０％. ３SC/T３０６６—２０２５ 附　录　A (资料性) 液相色谱图 　 A􀆰１　岩藻黄素标准溶液 岩藻黄素标准溶液的液相色谱图(１􀆰００μg/mL)见图A􀆰１. 图A􀆰１　岩藻黄素标准溶液的液相色谱图(１􀆰００μg/mL) A􀆰２　龙须菜加标试样 龙须菜加标试样的液相色谱图(添加浓度２５mg/kg)见图A􀆰２. 图A􀆰２　龙须菜加标试样的液相色谱图(添加浓度２５mg/kg) A􀆰３　干海带试样 干海带试样的液相色谱图见图A􀆰３. ４SC/T３０６６—２０２５ 图A􀆰３　干海带试样的液相色谱图 A􀆰４　鲜海带试样 鲜海带试样的液相色谱图见图A􀆰４ 图A􀆰４　鲜海带试样的液相色谱图 A􀆰５　盐渍海带试样 盐渍海带试样的液相色谱图见图A􀆰５. 图A􀆰５　盐渍海带试样的液相色谱图 ５