2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 海 藻 中 多 种 单 糖 的 测 定 离 子 色 谱 法 2 0 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 7 . 0 5 0 C C S X 3 0 6 5 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f m o n o s a c c h a r i d e s i n s e a w e e d — I o n c h r o m a t o g r a p h y S C ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布SC/T３０６５—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出. 本文件由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会(SAC/TC１５６/SC３)归口. 本文件起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所、广东海洋大学、山东洁晶集团股份有限公司、 青岛盛瀚色谱技术有限公司、赛默飞世尔科技(中国)有限公司、北京雷力海洋生物新产业股份有限公司、 上海中维检测技术有限公司. 本文件主要起草人:孙晓杰、王联珠、孙伟红、钟赛意、徐利、郭莹莹、朱文嘉、韩春霞、牛军舰、张锦梅、 梁仁雷、汤洁、李兆新、姚琳、邢丽红、彭吉星、李娜、王心鹏、严国富、刘丹丹、王静、周利杰、王小娟、金安琪. ⅠSC/T３０６５—２０２５ 海藻中多种单糖的测定　离子色谱法 １　范围 本文件描述了用离子色谱法测定海藻中多种单糖的原理、试剂和材料、仪器设备、试样的制备与保存、 测定步骤、数据处理以及灵敏度、准确度和精密度. 本文件适用于鲜海藻及干海藻中岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖和核糖等多种单 糖含量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样中的海藻多糖在酸性条件下水解为海藻单糖,经极性有机溶剂净化,离子色谱电化学检测器测 定,外标法定量. ５　试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,试验用水应符合GB/T６６８２一级水的规定. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯. ５􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH):色谱纯. ５􀆰１􀆰３　三氟乙酸(CF３COOH). ５􀆰１􀆰４　氢氧化钠(NaOH):色谱纯. ５􀆰１􀆰５　５０％氢氧化钠溶液(质量分数):离子色谱专用;或参照５􀆰３􀆰２配制. ５􀆰２　标准品 ５􀆰２􀆰１　岩藻糖(C６H１２O５,CAS号:２４３８Ｇ８０Ｇ４):纯度≥９８％. ５􀆰２􀆰２　鼠李糖(C６H１４O６,CAS号:１００３０Ｇ８５Ｇ０):纯度≥９８％. ５􀆰２􀆰３　半乳糖(C６H１２O６,CAS号:５９Ｇ２３Ｇ４):纯度≥９８％. ５􀆰２􀆰４　葡萄糖(C６H１２O６,CAS号:９２１Ｇ６０Ｇ８):纯度≥９８％. ５􀆰２􀆰５　木糖(C５H１０O５,CAS号:５８Ｇ８６Ｇ６):纯度≥９８％. ５􀆰２􀆰６　甘露糖(C６H１２O６,CAS号:１００３０Ｇ８０Ｇ５):纯度≥９８％. ５􀆰２􀆰７　果糖(C６H１２O６,CAS号:５７Ｇ４８Ｇ７):纯度≥９８％. ５􀆰２􀆰８　核糖(C５H１０O５,CAS号:５０Ｇ６９Ｇ１):纯度≥９８％.　 ５􀆰３　溶液配制 １SC/T３０６５—２０２５ ５􀆰３􀆰１　２mol/L三氟乙酸溶液:准确移取１５mL三氟乙酸(５􀆰１􀆰３),用水稀释并定容至１００mL,现用 现配. ５􀆰３􀆰２　５０％氢氧化钠溶液(质量分数):称取５０􀆰０g氢氧化钠(５􀆰１􀆰４),加入５０􀆰０g水中,加热溶解后冷却 至室温,密封保存. ５􀆰３􀆰３　２００mmol/L氢氧化钠溶液:量取１０􀆰４mL氢氧化钠溶液(５􀆰１􀆰５或５􀆰３􀆰２),用水稀释并定容至 １０００mL,现用现配. ５􀆰３􀆰４　５０mmol/L氢氧化钠溶液:量取２􀆰６mL氢氧化钠溶液(５􀆰１􀆰５或５􀆰３􀆰２),用水稀释并定容至 １０００mL,现用现配. ５􀆰４　标准溶液配制 ５􀆰４􀆰１　标准储备液(１􀆰０mg/mL):分别准确称取岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、果糖和 核糖各１０mg(精确至０􀆰０１mg),用水溶解并定容于１０mL容量瓶中,配制成浓度为１􀆰０mg/mL的储备 液.－１８℃下聚乙烯(PE)管保存,有效期为１个月. ５􀆰４􀆰２　混合标准中间液:分别吸取岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、核糖和果糖标准储备液 (５􀆰４􀆰１)适量,用水稀释配制成岩藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露糖、核糖浓度为１０μg/mL,果 糖浓度为２０μg/mL的混合标准中间液,现用现配. ５􀆰５　材料 ５􀆰５􀆰１　具塞消化管:２０mL螺旋盖玻璃试管,配置聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBTP)耐压盖. ５􀆰５􀆰２　具塞离心管:１５mL,聚丙烯材质. ５􀆰５􀆰３　比色管:１０mL. ５􀆰５􀆰４　容量瓶:１０mL、１００mL、１０００mL. ５􀆰５􀆰５　水相微孔滤膜:０􀆰２２μm. ５􀆰５􀆰６　高纯氮气:纯度≥９９􀆰９９９％. ６　仪器设备 ６􀆰１　离子色谱仪:配电化学检测器,四元泵. ６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g. ６􀆰３　天平:感量０􀆰００１g. ６􀆰４　氮吹仪. ６􀆰５　离心机:转速不低于４０００r/min. ６􀆰６　电热恒温干燥箱. ６􀆰７　涡旋振荡器. ６􀆰８　高速组织匀浆机. ６􀆰９　粉碎机. ７　试样的制备与保存 ７􀆰１　鲜样 鲜海藻试样,去除砂石等杂质后均质,于－１８℃以下保存备用. ７􀆰２　干样 干海藻试样,用粉碎机打碎,过４２５μm(４０目)网筛,混匀后装入洁净容器中,室温密封保存备用. ８　测定步骤 ８􀆰１　水解 ２SC/T３０６５—２０２５ 称取１g(精确至０􀆰０１g)海藻鲜样或０􀆰１g(精确至０􀆰００１g)海藻干样于２０mL具塞消化管(５􀆰５􀆰１) 中,加入５mL２mol/L三氟乙酸溶液(５􀆰３􀆰１),涡旋,充氮封管,置于电热恒温干燥箱中,１１０℃水解３h. 取出消化管冷却至室温,将水解液全部转移至１５mL具塞离心管(５􀆰５􀆰２),用２mL水冲洗消化管,转移冲 洗液至上述１５mL离心管中,再加２mL水重复操作一次,合并冲洗液,４０００r/min离心５min,将上清液 转移至容量瓶后加水定容至１０mL,摇匀,待净化. ８􀆰２　净化 准确移取１mL上述待净化液至１０mL比色管(５􀆰５􀆰３)中,加入１mL甲醇(５􀆰１􀆰２),６０℃氮气吹至 近干,再加１mL甲醇溶解残渣,重复氮吹至近干操作３次.准确加入４mL水溶解残渣,再加入６mL乙 腈(５􀆰１􀆰１)涡旋混匀后,加乙腈定容至１０mL,４０００r/min离心５min,上清液经０􀆰２２μm微孔滤膜 (５􀆰５􀆰５)过滤后,供离子色谱分析. ８􀆰３　标准工作曲线的绘制 准确移取混合标准中间液(５􀆰４􀆰２)适量,用水配制成岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、核 糖质量浓度分别为０􀆰１μg/mL、０􀆰２μg/mL、０􀆰５μg/mL、１􀆰０μg/mL、２􀆰０μg/mL、５􀆰０μg/mL,果糖浓度 分别为０􀆰２μg/mL、０􀆰４μg/mL、１􀆰０μg/mL、２􀆰０μg/mL、４􀆰０μg/mL、１０μg/mL的系列单糖混合标准工 作液,以各单糖的峰面积为纵坐标,相应单糖浓度为横坐标,绘制标准工作曲线.多种单糖混合标准溶液 的离子色谱图见附录A中的图A􀆰１. ８􀆰４　测定 ８􀆰４􀆰１　色谱参考条件 离子色谱参考条件如下: a)　色谱柱:阴离子交换柱(１５０mm×３mm,粒径６􀆰０μm,以季铵盐为功能基,乙基乙烯基苯/二乙 烯基苯树脂作为填料),带３０mm×３mm保护柱,或性能相当者. b)电化学检测器:Au工作电极;Ag/AgCl参比电极;糖检测波形参考条件见表１. 表１　糖检测波形 时间 s电压 V积分时间 s电压 V积分 ０􀆰００ ＋０􀆰１０ — ０􀆰４２ －２􀆰００ — ０􀆰２０ ＋０􀆰１０ 开始 ０􀆰４３ ＋０􀆰６０ — ０􀆰４０ ＋０􀆰１０ 结束 ０􀆰４４ －０􀆰１０ — ０􀆰４１ －２􀆰００ — ０􀆰５０ －０􀆰１０ — c)流速:０􀆰４５mL/min; d)柱温:３０℃; e)进样量:２５μL; f)淋洗液:A:水;B:５０mmol/LNaOH溶液(５􀆰３􀆰４,高纯氮气保护);C:２００mmol/LNaOH溶液 (５􀆰３􀆰３,高纯氮气保护);梯度洗脱参考条件见表２. 表２　梯度洗脱条件 时间 minA ％B ％C ％ ０􀆰０ ９８ ２ ０ ２０􀆰０ ９８ ２ ０ ２０􀆰１ ０ ０ １００ ３５􀆰０ ０ ０ １００ ３５􀆰１ ９８ ２ ０ ４５􀆰０ ９８ ２ ０ ８􀆰４􀆰２　测定方法 ８􀆰４􀆰２􀆰１　定性方法 ３SC/T３０６５—２０２５ 按８􀆰４􀆰１的色谱条件进行测定,根据各单糖色谱峰的保留时间定性.在相同测试条件下,试样溶液中 各单糖色谱峰的保留时间与相应单糖标准溶液色谱峰的保留时间偏差应在±２􀆰５％以内. ８􀆰４􀆰２􀆰２　定量方法 将试样溶