2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 硬 壳 蛤 5 1 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 5 0 C C S B 2 1 3 0 — 2 0 2 5 H a r d c l a m S C ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布SC/T２１３０—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出. 本文件由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会(SAC/TC１５６/SC２)归口. 本文件起草单位:中国科学院海洋研究所、天津农学院、唐山海都水产食品有限公司、连云港中科美 贝海洋科技有限公司、山东美贝海洋科技有限公司、广东海洋大学、江苏海洋大学、山东得和明兴生物科技 有限公司、滨州市海洋发展研究院、连云港蓝碳海洋科技有限公司、福建省莆田市海源实业有限公司、威海 市海洋发展研究院. 本文件主要起草人:张涛、宋浩、杨美洁、李永仁、郭永军、于浩林、张海恩、孟凡玉、肖锴、赵力强、 董志国、邱彦国、杨晓坤、孙同秋、王洪滨、李卫东、葛红星、任国梁、林杰、毛嘉、刘心田. ⅠSC/T２１３０—２０２５ 硬壳蛤 １　范围 本文件确定了硬壳蛤[Mercenariamercenaria(Linnaeus,１７５８)]的学名与分类,规定了主要形态结构 特征、生长与繁殖特性、细胞遗传学特性与分子遗传学特性,描述了相应的检测方法,规定了判定规则. 本文件适用于硬壳蛤的种质鉴定与检测. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T２２２１３　水产养殖术语 GB/T３２７５７　贝类染色体组型分析 ３　术语和定义 GB/T２２２１３界定的术语和定义适用于本文件. ４　学名与分类 ４􀆰１　学名 硬壳蛤Mercenariamercenaria(Linnaeus,１７５８). ４􀆰２　分类地位 软体动物门(Mollusca),双壳纲(Bivalvia),帘蛤目(Veneroida),帘蛤科(Veneridae),硬壳蛤属(MerＧ cenaria). ５　主要形态结构特征 ５􀆰１　外部形态 壳呈三角卵圆形,壳质坚厚.两壳大小相等,壳长略大于壳高.壳顶前倾,略高出背缘,位于背缘中央 偏前方.小月面宽大,心脏形;楯面不明显.壳表具有细密的同心生长纹,在壳的前、后部更显著,幼贝具 片状同心肋;放射肋不明显.壳面白色,饰有放射状的红棕色色带.硬壳蛤外部形态见图１. ５􀆰２　内部结构 ５􀆰２􀆰１　外套膜与水管 外套膜中央薄而透明,在背缘愈合.水管短,出水管稍细,位于入水管之上. ５􀆰２􀆰２　足 足呈斧刀状,两侧扁平. ５􀆰２􀆰３　鳃 身体左右各有鳃２片,外鳃小于内鳃,背缘与内脏囊相连. ５􀆰２􀆰４　闭壳肌与闭壳肌痕 后闭壳肌略大于前闭壳肌,上方各有一缩足肌,肌痕均明显.后闭壳肌痕略大于前闭壳肌痕,在前后 闭壳肌上方各有一缩足肌痕. ５􀆰２􀆰５　绞合部 左右两壳各具一主齿,左主齿呈“人”字形,右主齿呈“八”字形.左壳前后侧齿呈单片,右壳前后侧齿 １SC/T２１３０—２０２５ 标引序号说明: １———壳顶;　　　　　　　６———楯面;　　　　　　　１１———后端; ２———生长纹; ７———壳长; １２———左壳; ３———同心肋; ８———壳宽; １３———右壳. ４———色带; ９———壳高; ５———小月面; １０———前端; 图１　硬壳蛤外部形态 为双片.内韧带位于主齿后方,褐色,三角形. ５􀆰２􀆰６　外套窦 外套窦短而小,锐三角形,前端尖. 硬壳蛤内部结构见图２. ５􀆰２􀆰７　壳内侧结构 壳内面白色,顶区或为蓝紫色,内腹缘具齿状缺刻. 　　标引序号说明: 　　１———肝胰腺;　　　　　　　　　　　９———足;　　　　　　　　　　　１７———铰合部; 　　２———动脉球; １０———水管肌; １８———侧齿; 　　３———前缩足肌; １１———出水管; １９———缩足肌痕; 　　４———后缩足肌; １２———进水管; ２０———前闭壳肌痕; 　　５———鳃; １３———外套膜; ２１———后闭壳肌痕; 　　６———前闭壳肌; １４———外套膜环肌; ２２———外套窦; 　　７———后闭壳肌; １５———壳顶; ２３———齿状缺刻; 　　８———生殖腺; １６———外韧带; ２４———主齿. 图２　硬壳蛤内部结构 ２SC/T２１３０—２０２５ ６　生长与繁殖特性 ６􀆰１　生长 １龄壳长可达３０mm以上. ６􀆰２　繁殖 ６􀆰２􀆰１　性成熟年龄 １龄. ６􀆰２􀆰２　繁殖方式 雌雄异体,体外受精.极少数个体会发生性逆转,出现雌雄同体现象. ６􀆰２􀆰３　繁殖期 一年多次性成熟,全年均可繁殖. ６􀆰２􀆰４　怀卵量 ２×１０６粒~３×１０６粒. ６􀆰２􀆰５　精卵特征 卵子直径７０μm~９０μm,包有一层胶质的卵膜.精子头部１􀆰０μm×１􀆰７μm,尾部细长,长度为头部 的１􀆰０倍~１􀆰５倍. ７　细胞遗传学特性 染色体数目:２n＝３８. ８　分子遗传学特性 线粒体COI基因片段的碱基参考序列如下(５２８bp): GGGTACTGCT　TTTAGTGTTA　TTATTCGTAT　AGAACTGGCT　ATACCTGGAA　　５０ AGATGTTGGATGATGGGCAGTTGTATAATTTAATTGTTACTGCACATGGT１００ TTAGTAATGATTTTTTTTCTAGTTATGCCAATAATGATTGGAGGTTTTGG１５０ GAATTGGTTGGTTCCTTTAATATTAACTATGCCTGATATGGCGTTTCCTC２００ GAATGAATAATCTGAGTTTCTGGTTGTTACCAGTGTCAATGCTTTTGTTA２５０ TTAGGTTCTGCTTATGTAGATGGGGGAGCTGGAACAGGGTGAACTATTTA３００ TCCTCCGCTGTCTAGGGCTCTTTCTCATTCTGGTAGCTCAATGGATTATG３５０ TTATTTTTTCTCTTCATGTGGGTGGTGCATCTTCTATTTTGGCGTCAATT４００ AATTTCGTTAGAACTAGTTTCTTGATGCGTCCGGGTGTTATGGTGTTGCT４５０ GCGTACTAGAATGTTTGTCTGATGTGTAGCTGTAACCGGGTTCCTTCTTA５００ TTGTAGCAATGCCTGTTTTGGCTGGGGC ５２８ 种内K２P(Kimura２Ｇparameter)遗传距离应小于２％. ９　检测方法 ９􀆰１　主要形态结构特征 ９􀆰１􀆰１　外部形态 将样品置于白色瓷盘上,在光线充足的环境下,采用目视法观察. ９􀆰１􀆰２　内部结构 去除样品的右壳,露出完整的软体部,将右外套膜与内脏团连接处分离,采用目视法观察;后将软体部 去除,露出完整左壳内侧,采用目视法观察. ９􀆰２　生长与繁殖特性 ９􀆰２􀆰１　生长 ３SC/T２１３０—２０２５ 用游标卡尺测量壳长. ９􀆰２􀆰２　繁殖 ９􀆰２􀆰２􀆰１　性成熟年龄 养殖个体按照实际养殖时间判定年龄. ９􀆰２􀆰２􀆰２　怀卵量 取性成熟雌性个体,解剖刀划开性腺组织表面,使用过滤海水和解剖刀将性腺组织中的卵子全部剥离 冲洗至烧杯中,塑料滴管反复吹打卵块至均匀散开,使用３００目筛绢滤除组织碎屑后,加海水定容.搅拌 均匀,在不同位点等体积取卵液到细胞计数器,计数后计算卵子密度.重复取样计数３次以上,计算卵子 密度平均值,根据定容后卵液体积计算怀卵量. ９􀆰２􀆰２􀆰３　精卵特征 显微镜下以目微尺测量卵径和精子大小. ９􀆰３　细胞遗传学特性 按照GB/T３２７５７的规定进行检测.采用成体鳃组织法,秋水仙素浓度为２００mg/L,处理时间为 ３０min;０􀆰０７５mol/L的KCl溶液低渗,低渗时间为４０min;热滴片法滴片. ９􀆰４　分子遗传学特性 按照附录A的方法检测. １０　判定规则 １０􀆰１　当检测结果符合第５章的要求时,可判定为该物种. １０􀆰２　当出现下列情况之一时,需增加检测其他章节要求内容,依据检测结果对物种进行综合判定: a)　第５章无法进行检测或准确判定时,增加检测第７章或第８章的内容; b)第三方提出要求检测第６章全部或部分内容时; c)全项检测时. ４SC/T２１３０—２０２５ 附　录　A (规范性) 线粒体COI片段分子特征检测 　 A􀆰１　总DNA提取 取足肌肉组织３０mg~３５mg,按照酚氯仿抽提法或者使用试剂盒进行总DNA的提取. A􀆰２　引物序列 COIＧF１:５′ＧTTTTCTATTTGGGCAGGTCTＧ３′; COIＧR１:５′ＧCCTAACCCTACAGGATCAAAAＧ３′. A􀆰３　PCR扩增 反应体系包括０􀆰５μLTaqDNA聚合酶(２􀆰５U/μL),各０􀆰５μL的正反向引物(１０μmol/L),２μL的 dNTP(２􀆰５mmol/L),２􀆰５μL的１０×PCR缓冲液[２００mmol/LTrisＧHCl,pH８􀆰４;２００mmol/LKC