2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 植 物 源 性 食 品 中 γ - 氨 基 丁 酸 含 量 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 0 4 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 8 8 7 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f γ - a m i n o b u t y r i c a c i d i n f o o d s o f p l a n t o r i g i n b y h i g h p e r f o r m a n c e — L i q u i d c h r o m a t o g r a p h y m e t h o d Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４８８７—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农产品质量安全监管司提出. 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口. 本文件起草单位:北京市营养源研究所有限公司、农业农村部食物与营养发展研究所、内蒙古蒙牛乳 业(集团)股份有限公司、内蒙古伊利实业集团股份有限公司、中国农业科学院农产品加工研究所、北京工 商大学、黑龙江飞鹤乳业有限公司、北京臻味坊食品有限公司、北京京瓦农业科技创新中心、北京市农林科 学院农产品加工与食品营养研究所. 本文件主要起草人:崔亚娟、朱大洲、潘玲、顾海华、张淏惟、孔凡华、白沙沙、许洪高、宋晓东、马文丽、 李翠枝、陈素敏、刘璇、许朵霞、刘野、王象欣、耿德胜、彭珍、郭斗斗、刘光敏. ⅠNY/T４８８７—２０２５ 植物源性食品中γＧ氨基丁酸含量的测定　高效液相色谱法 １　范围 本文件规定了植物源性食品中γＧ氨基丁酸含量的高效液相色谱测定方法. 本文件适用于植物源性食品中γＧ氨基丁酸含量的测定.补充线性范围信息. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２分析实验室用水规格和试验方法. ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样经乙醇水溶液提取,经４Ｇ二甲基胺基偶氮苯Ｇ４Ｇ磺酰氯(DABSＧCl)衍生,用高效液相色谱法测 定,以保留时间定性,外标法定量. ５　试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　无水乙醇(C２H５OH):优级纯. ５􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH):优级纯. ５􀆰１􀆰３　甲醇(CH３OH):色谱纯. ５􀆰１􀆰４　乙腈(CH３CN):色谱纯. ５􀆰１􀆰５　碳酸氢钠(NaHCO３). ５􀆰１􀆰６　三水合乙酸钠(CH３COONa􀅰３H２O). ５􀆰１􀆰７　４Ｇ二甲基胺基偶氮苯Ｇ４Ｇ磺酰氯(C１４H１４CIN３O２S):简称DABSＧCl. ５􀆰２　试剂配制 ５􀆰２􀆰１　乙醇水溶液:无水乙醇＋水＝６＋４(V＋V),取无水乙醇(５􀆰１􀆰１)６００mL和水４００mL,混匀. ５􀆰２􀆰２　碳酸氢钠溶液(０􀆰０４g/mL):称取碳酸氢钠(５􀆰１􀆰５)０􀆰４０g,用水溶解后,转移到１０mL容量瓶中, 用水定容,混匀,现配现用. ５􀆰２􀆰３　４Ｇ二甲基胺基偶氮苯Ｇ４Ｇ磺酰氯溶液(２􀆰０mg/mL):称取DABSＧCl(５􀆰１􀆰７)２０􀆰０mg,用乙腈 (５􀆰１􀆰４)溶解后,转移至１０mL棕色容量瓶中,用乙腈(５􀆰１􀆰４)定容,混匀,现配现用. ５􀆰２􀆰４　乙酸钠溶液(６􀆰８mg/mL):称取三水合乙酸钠(５􀆰１􀆰６)３􀆰４０g,用水溶解并稀释至５００mL,经微孔 滤膜过滤. ５􀆰３　标准品 ５􀆰３􀆰１　γＧ氨基丁酸(γＧaminobutyricacid,GABA,C４H９NO２,CAS号:５６Ｇ１２Ｇ２):纯度≥９９􀆰９％,或经国家 认证并授予标准物质证书的标准物质. １NY/T４８８７—２０２５ ５􀆰４　标准溶液配制 ５􀆰４􀆰１　标准储备液(１０００μg/mL):称取γＧ氨基丁酸(５􀆰３􀆰１)１０􀆰０mg(精确至０􀆰１mg),用无水乙醇 (５􀆰１􀆰１)溶解后,转移到１０mL棕色容量瓶中,用无水乙醇(５􀆰１􀆰１)定容至刻度.标准储备液储存于密闭 棕色玻璃瓶中,于－１８℃中冷冻保存,有效期３个月. ５􀆰４􀆰２　标准工作液:分别移取标准储备液(５􀆰４􀆰１)０􀆰２５mL、０􀆰５０mL、１􀆰００mL、１􀆰５０mL、２􀆰００mL、 ３􀆰００mL于５０mL棕色容量瓶中,用乙醇水溶液(５􀆰２􀆰１)定容至刻度,得到浓度为５􀆰００μg/mL、１０􀆰００μg/mL、 ２０􀆰００μg/mL、３０􀆰００μg/mL、４０􀆰００μg/mL、６０􀆰００μg/mL的系列标准工作液,现用现配. ５􀆰５　材料 ５􀆰５􀆰１　有机系微孔滤膜:孔径为０􀆰４５μm. ５􀆰５􀆰２　网筛:孔径为０􀆰４２５mm. ６　仪器与设备 ６􀆰１　天平:感量０􀆰０００１g和０􀆰００００１g. ６􀆰２　高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器或性能相当的检测器. ６􀆰３　离心机:转速≥５０００r/min. ６􀆰４　涡旋混合器. ６􀆰５　数控超声波清洗器. ６􀆰６　振荡水浴锅. ６􀆰７　匀浆机. ６􀆰８　高速粉碎机. ７　分析步骤 ７􀆰１　试样制备 样品取可食部分进行制备.均匀的液体样品混匀后直接取样;带悬浮物的液体样品、新鲜果蔬、半固 体等样品采用匀浆机匀浆混匀,置于－１８℃冷冻保存,备用;固体样品采用高速粉碎机粉碎,过０􀆰４２５mm 网筛后,储存备用. ７􀆰２　试样处理 ７􀆰２􀆰１　提取 称取干样１􀆰０g~２􀆰０g,鲜样２􀆰０g~５􀆰０g(精确至０􀆰００１g)于５０mL离心管中,加入乙醇水溶液 (５􀆰２􀆰１)１０mL,超声提取３０min,涡旋混匀器上振荡２min,静置５min,５０００r/min离心５min,上清液 转入２５mL容量瓶中,残渣再用１０mL提取溶液提取一次,合并２次提取液,用乙醇水溶液(５􀆰２􀆰１)定容 至２５mL,摇匀,待衍生化. ７􀆰２􀆰２　衍生化 准确吸取１mL试样溶液或标准工作溶液于具塞试管中,加入０􀆰２mL碳酸氢钠溶液(５􀆰２􀆰２)和 ０􀆰４mL４Ｇ二甲基胺基偶氮苯Ｇ４Ｇ磺酰氯溶液(５􀆰２􀆰３),混匀后在７０℃水浴中衍生反应２０min,用微孔滤膜 (５􀆰５􀆰１)过滤,待测. ７􀆰３　测定 ７􀆰３􀆰１　仪器参考条件 ７􀆰３􀆰１􀆰１　色谱柱:C１８柱,１５０mm×４􀆰６mm,５μm,或具同等性能的色谱柱; ７􀆰３􀆰１􀆰２　柱温:３０℃; ７􀆰３􀆰１􀆰３　流动相:乙腈(５􀆰１􀆰４)＋乙酸钠溶液(５􀆰２􀆰４)(３５＋６５); ７􀆰３􀆰１􀆰４　流速:１􀆰０mL/min; ２NY/T４８８７—２０２５ ７􀆰３􀆰１􀆰５　检测波长:４３６nm; ７􀆰３􀆰１􀆰６　进样量:１０μL. ７􀆰３􀆰２　标准曲线的制作 将系列标准工作液分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰 面积为纵坐标,绘制标准曲线. ７􀆰３􀆰３　样品的测定 试样溶液经高效液相色谱仪分析,测得峰面积,根据标准溶液色谱峰的保留时间和峰面积,对试样溶 液的色谱峰进行定性,外标法定量.γＧ氨基丁酸标准溶液液相色谱图见附录A. ８　分析结果的表述 试样中γＧ氨基丁酸含量按公式(１)计算. ω＝ρ×V×１０００ m×１０００(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: ω———试样中γＧ氨基丁酸含量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg); ρ———根据标准曲线计算得到的γＧ氨基丁酸质量浓度的数值,单位为微克每毫升(μg/mL); V———试样溶液定容体积的数值,单位为毫升(mL); m———测试样品称样质量的数值,单位为克(g); 以２次测定结果的算术平均值表示,计算结果保留３位有效数字. ９　精密度 ９􀆰１　重复性 在重复性条件下获得的２次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１０％. ９􀆰２　再现性 在再现性条件下获得的２次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１０％. １０　检出限和定量限 当样品取样量为５􀆰０g,定容体积为５０mL时,γＧ氨基丁酸的检出限为０􀆰０３mg/kg,定量出限为 ０􀆰１０mg/kg. ３NY/T４８８７—２０２５ 附　录　A (资料性) γＧ氨基丁酸标准溶液高效液相色谱图 　 γＧ氨基丁酸标准溶液高效液相色谱图(５􀆰０μg/mL)见图A􀆰１. 图A􀆰１　γＧ氨基丁酸标准溶液高效液相色谱图(５􀆰０μg/mL) ４