2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 土 壤 中 磺 胺 类 、 喹 诺 酮 类 、 四 环 素 类 、 大 环 内 酯 类 和 氯 霉 素 类 抗 生 素 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 - 质 谱 联 用 法 1 1 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 1 3 . 0 8 0 . 0 1 C C S B 4 8 7 0 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f s u l f o n a m i d e s , q u i n o l o n e s , t e t r a c y c l i n e s , m a c r o l i d e s a n d c h l o r a m p h e n i c o l s a n t i b i o t i c s i n s o i l — L i q u i d c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y m e t h o d Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４８７０—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部科学技术司提出. 本文件由农业农村部农业资源环境标准化技术委员会归口. 本文件起草单位:农业农村部环境保护科研监测所、中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所. 本文件主要起草人:孙宝利、贺泽英、陈永杏、陕红、邓凯、史小萌、张珊、黄金丽、封朝晖、何沛侨、赤杰、 仝乘风. ⅠNY/T４８７０—２０２５ 土壤中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和 氯霉素类抗生素残留量的测定　液相色谱质谱联用法 １　范围 本文件规定了土壤中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和氯霉素类共５４种抗生素(见附录A) 残留量的液相色谱Ｇ质谱联用测定方法. 本文件适用于土壤中５４种抗生素残留量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅 该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 NY/T５２　土壤水分测定法 NY/T３９５　农田土壤环境质量监测技术规范 ３　原理 试样中的抗生素用乙腈和磷酸盐缓冲液混合溶液提取,提取液经分离、分散固相萃取净化和旋转蒸发 浓缩,液相色谱Ｇ质谱联用仪检测,外标法定量. ４　试剂和材料 除非另有说明,在分析中仅使用分析纯的试剂,水为GB/T６６８２规定的一级水. ４􀆰１　试剂 ４􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN,CAS号:７５Ｇ０５Ｇ８). ４􀆰１􀆰２　甲醇(CH４O,CAS号:６７Ｇ５６Ｇ１):色谱纯. ４􀆰１􀆰３　甲酸(CH２O２,CAS号:６４Ｇ１８Ｇ６). ４􀆰１􀆰４　磷酸(H３PO４,CAS号:７６６４Ｇ３８Ｇ２). ４􀆰１􀆰５　磷酸二氢钾(KH２PO４,CAS号:７７７８Ｇ７７Ｇ０). ４􀆰１􀆰６　乙二胺四乙酸二钠二水合物(C１０H１４N２Na２O８􀅰２H２O,CAS号:６３８１Ｇ９２Ｇ６). ４􀆰１􀆰７　无水硫酸镁(MgSO４,CAS号:７４８７Ｇ８８Ｇ９). ４􀆰１􀆰８　氯化钠(NaCl,CAS号:７６４７Ｇ１４Ｇ５). ４􀆰１􀆰９　氨Ｇ甲醇溶液(NH３,CAS号:７６６４Ｇ４１Ｇ７):７mol/L. ４􀆰２　溶液配制 ４􀆰２􀆰１　磷酸盐缓冲溶液:称取２７􀆰２g磷酸二氢钾用水溶解,加入１􀆰３５mL磷酸混匀,用水稀释至１L. ４􀆰２􀆰２　乙腈Ｇ甲酸溶液(９５＋５):量取５０mL甲酸加入９５０mL乙腈中,混匀. ４􀆰２􀆰３　甲酸Ｇ水溶液(１＋９９):量取１mL甲酸加入９９mL水中,混匀. ４􀆰２􀆰４　甲醇Ｇ甲酸水溶液(５０＋５０):量取５０mL甲醇加入５０mL甲酸Ｇ水溶液(４􀆰２􀆰３),混匀. ４􀆰３　标准品 ５４种抗生素标准品,见附录A,纯度≥９５％. ４􀆰４　标准溶液配制 ４􀆰４􀆰１　标准储备溶液:磺胺喹 啉、诺氟沙星、氟罗沙星、西诺沙星、吡哌酸、环丙沙星、洛美沙星、奥比沙 １NY/T４８７０—２０２５ 星、 喹酸和泰乐菌素分别准确称取标准品约１０mg(精确至０􀆰１mg)于烧杯中,用甲醇溶解后转移至 １００mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混匀,配制成质量浓度为１００mg/L的标准储备溶液;其他抗生素, 分别准确称取标准品约１０mg(精确至０􀆰１mg)于烧杯中,用甲醇溶解后转移至１０mL容量瓶中,用甲醇 定容至刻度,混匀,配制成质量浓度为１０００mg/L的标准储备溶液.避光－２０℃及以下条件保存,有效 期６个月. ４􀆰４􀆰２　混合标准储备溶液(２０mg/L):吸取一定量的农药标准储备溶液于容量瓶中,用甲醇定容至刻度, 避光－２０℃及以下条件保存,有效期３个月. ４􀆰４􀆰３　混合标准溶液(５mg/L):吸取一定量混合标准储备溶液于容量瓶中,用甲醇定容至刻度,避光 －２０℃及以下条件保存,有效期１个月. ４􀆰５　材料 ４􀆰５􀆰１　陶瓷均质子:２cm(长)×１cm(外径),或相当者. ４􀆰５􀆰２　十八烷基硅烷键合硅胶(C１８):粒径４０μm~６０μm. ４􀆰５􀆰３　乙二胺ＧNＧ丙基硅烷化硅胶(PSA):４０μm~６０μm. ４􀆰５􀆰４　微孔滤膜(有机相):１３mm×０􀆰２２μm,或相当者. ５　仪器设备 ５􀆰１　液相色谱Ｇ三重四极杆质谱联用仪:配有电喷雾离子源(ESI). ５􀆰２　旋转蒸发仪:可控温. ５􀆰３　分析天平:感量０􀆰１mg和０􀆰０１g. ５􀆰４　涡旋混合仪. ５􀆰５　离心机:转速不低于４０００r/min. ６　试样制备 按照NY/T３９５的要求采集新鲜土壤样品,去除石子、植物根茎等杂质后混合均匀,不风干,放入聚乙 烯瓶或袋中.将样品按照测试和备用分别存放,于－２０℃及以下条件保存.按照NY/T５２测定样品含 水量. ７　测定步骤 ７􀆰１　前处理 称取２g试样(精确至０􀆰０１g)于５０mL塑料离心管中,加入０􀆰４g乙二胺四乙酸二钠二水合物 (４􀆰１􀆰６)、１颗陶瓷均质子,然后加入１０mL磷酸缓冲溶液(４􀆰２􀆰１)和１０mL乙腈Ｇ甲酸溶液(４􀆰２􀆰２),涡旋 振荡提取３min,４０００r/min离心５min,将上清液全部转移至５０mL塑料离心管中,再加入１０mL磷酸 盐缓冲溶液(４􀆰２􀆰１)和１０mL乙腈Ｇ甲酸溶液(４􀆰２􀆰２)重复提取１次,合并上清液.向合并的提取液中加入 １０g氯化钠,剧烈振荡３０s后４０００r/min离心５min,吸取８mL上清液至内含１２００mg无水硫酸镁、 ２００mgC１８、２００mgPSA的１５mL塑料离心管中,涡旋混匀１min.４０００r/min离心５min,准确吸取５ mL上清液于１００mL鸡心瓶中,加入０􀆰２５mL氨Ｇ甲醇溶液(４􀆰１􀆰９),混合均匀后在４０℃水浴条件下旋转 蒸发至近干.加入１mL甲醇Ｇ甲酸水溶液(４􀆰２􀆰４)复溶,过微孔滤膜,用于测定. 注:测定四环素类抗生素(金霉素、土霉素、四环素、多西环素)和螺旋霉素时,净化材料中不使用PSA. ７􀆰２　测定 ７􀆰２􀆰１　仪器参考条件 ７􀆰２􀆰１􀆰１　液相色谱参考条件 a)　色谱柱:C１８[２􀆰１mm(内径)×１００mm,１􀆰８μm],或相当者; b)流动相:A相为０􀆰１％甲酸水溶液,B相为甲醇.流动相梯度条件见表１; ２NY/T４８７０—２０２５ 表１　流动相及其梯度条件(VA＋VB) 时间 minVA ％VB ％ ０ ９０ １０ １􀆰５ ９０ １０ ５􀆰０ ６０ ４０ ７􀆰１ １０ ９０ ８􀆰０ １０ ９０ ８􀆰１ ９０ １０ １０􀆰０ ９０ １０ c)流速:０􀆰３mL/min; d)柱温:４０℃; e)进样量:２μL. ７􀆰２􀆰１􀆰２　质谱参考条件 a)　离子源类型:电喷雾离子源(ESI); b)扫描方式:正离子和负离子同时扫描; c)电喷雾电压:正离子５５００V,负离子－４５００V; d)离子源温度:５００℃; e)雾化气:０􀆰３４５MPa; f)辅助加热气:０􀆰３４５MPa; g)多反应监测:每种抗生素分别选择至少２个子离子.所有需要检测的子离子按照出峰顺序,分时 段分别检测.每种抗生素的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数见附录B. ７􀆰２􀆰２　基质匹配标准工作曲线 空白土壤样品按照７􀆰１进行前处理,得到空白基质溶液.准确吸取一定量的混合标准溶液,逐级用空 白基质溶液稀释成质量浓度为０􀆰００１mg/L、０􀆰００２mg/L、０􀆰００５mg/L、０􀆰０１mg/L、０􀆰０２mg/L、 ０􀆰０５mg/L、０􀆰１mg/L、０􀆰２mg/L和０􀆰５mg/L的系列基质匹配标准工作溶液,根据仪器性能和检测需要 选择不少于５个质量浓度点,供液相色谱Ｇ质谱联用仪测定.以抗生素定量子离子的质量色谱峰面积为纵 坐标、相对应的基质匹配标准工作溶液质量浓度为横坐标,绘制基质匹配标准工作曲线. ７􀆰２􀆰３　定性及定量 ７􀆰２􀆰３􀆰１　定性测定 试样中目标抗生素色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较,相差应在±０􀆰１min 之内. 在相同实验条件下进行样品测定时,如