2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 饲 料 中 姜 黄 素 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 4 6 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 2 0 C C S B 4 8 4 1 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f c u r c u m i n o i d s i n f e e d s — H i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４８４１—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC７６)归口. 本文件起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所. 本文件主要起草人:严华、樊霞、宋荣、杨梦瑞、曹林、贾铮、李阳、李兰、田静、徐思远、张祯昊、崔婕、陈 雪、史合群、赖克强. ⅠNY/T４８４１—２０２５ 饲料中姜黄素的测定　高效液相色谱法 １　范围 本文件描述了饲料中姜黄素(姜黄素、脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素)的高效液相色谱测定 方法. 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂中姜黄素的 测定. 本文件配合饲料、浓缩饲料、精料补充料中姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素的检出限均为 １􀆰０mg/kg,定量限均为２􀆰５mg/kg;添加剂预混合饲料、混合型饲料添加剂中姜黄素、脱甲氧基姜黄素、 双脱甲氧基姜黄素的检出限均为３mg/kg,定量限均为１０mg/kg. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T２０１９５　动物饲料　试样的制备 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样中的姜黄素用甲醇提取,高效液相色谱仪测定,外标法定量. ５　试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂. ５􀆰１　水:GB/T６６８２,一级. ５􀆰２　甲醇:色谱纯. ５􀆰３　乙腈:色谱纯. ５􀆰４　磷酸二氢钾:优级纯. ５􀆰５　磷酸二氢钾溶液(５０mmol/L):称取磷酸二氢钾(５􀆰４)６􀆰８０４g,用水溶解,并定容至１０００mL,混匀. ５􀆰６　标准储备溶液(１mg/mL):准确称取姜黄素(CurⅠ,CAS号:４５８Ｇ３７Ｇ７,纯度≥９５％)、脱甲氧基姜 黄素(CurⅡ,CAS号:２２６０８Ｇ１１Ｇ３,纯度≥９５％)、双脱甲氧基姜黄素(CurⅢ,CAS号:２４９３９Ｇ１６Ｇ０,纯度≥ ９５％)标准品各５０mg(精确至０􀆰０１mg),分别置于５０mL棕色容量瓶中,用甲醇(５􀆰２)溶解并定容,混匀. 于２℃~８℃避光保存,有效期６个月. ５􀆰７　混合标准中间溶液(５０μg/mL):准确移取标准储备溶液(５􀆰６)各２􀆰５mL于５０mL棕色容量瓶中, 用甲醇(５􀆰２)稀释并定容,混匀.临用现配. ５􀆰８　混合标准系列工作溶液:准确移取适量混合标准中间溶液(５􀆰７),用甲醇(５􀆰２)稀释并定容,混匀,配 制成浓度为０􀆰１μg/mL、０􀆰５μg/mL、１􀆰０μg/mL、２􀆰５μg/mL、５􀆰０μg/mL、１０􀆰０μg/mL、２５􀆰０μg/mL的 混合标准系列工作溶液.临用现配. ５􀆰９　微孔滤膜:０􀆰４５μm,有机系. １NY/T４８４１—２０２５ ６　仪器设备 ６􀆰１　高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器或紫外可见光检测器. ６􀆰２　分析天平:精度为０􀆰０１g、０􀆰１mg和０􀆰０１mg. ６􀆰３　超声清洗器. ７　样品 按GB/T２０１９５的规定制备试样,不少于２００g,粉碎使其全部通过０􀆰４２５mm孔径的分析筛,充分混 匀,装入密闭容器中避光保存,备用. ８　试验步骤 ８􀆰１　试样溶液制备 平行做两份试验.称取配合饲料、浓缩饲料、精料补充料约２g(精确至０􀆰０１g),添加剂预混合饲料、 混合型饲料添加剂约０􀆰５g(精确至０􀆰１mg)于１００mL具塞三角烧瓶中,准确加入５０mL(V)甲醇(５􀆰２), 旋摇,超声提取２０min,中间旋摇１次,静置,取上清液过０􀆰４５μm滤膜(５􀆰９),待测. ８􀆰２　液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: a)　色谱柱:C１８柱,长２５０mm,内径４􀆰６mm,粒径５μm,或性能相当者; b)柱温:４０℃; c)检测波长:４２０nm; d)流动相:磷酸二氢钾溶液(５􀆰５)＋乙腈(５􀆰３)＝４５＋５５; e)流速:１􀆰０mL/min; f)进样量:１０μL. ８􀆰３　测定 ８􀆰３􀆰１　标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取混合标准系列工作溶液(５􀆰８)和试样溶液(８􀆰１)上机测定.姜黄素、脱甲 氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素混合标准溶液液相色谱图见附录A. ８􀆰３􀆰２　定性 在相同试验条件下,试样溶液中待测物的保留时间应与标准系列工作溶液(质量浓度相当)中待测物 的保留时间一致,其相对偏差在±２􀆰５％之内. ８􀆰３􀆰３　定量 以标准溶液中的被测组分的峰面积为纵坐标,标准溶液中被测组分的浓度为横坐标绘制标准曲线,其 相关系数应不低于０􀆰９９.试样溶液中待测物的响应值应在标准曲线的线性范围内.如超出线性范围,应 将试样溶液用甲醇稀释后重新测定.单点校准定量时,试样溶液中待测物的质量浓度与标准溶液质量浓 度相差不超过３０％. ９　试验数据处理 试样中CurⅠ、CurⅡ、CurⅢ的含量以质量分数wi计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示.多点校 准按公式(１)计算,单点校准按公式(２)计算. wi＝ρi×V×f×１０００ m×１０００(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: ρi　　———由标准曲线查得的试样溶液中待测物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———试样溶液体积,单位为毫升(mL); ２NY/T４８４１—２０２５ f———试样溶液的稀释倍数; m———试样质量,单位为克(g); １０００———换算系数. wi＝Ai×ρsi×V×f×１０００ Asi×m×１０００(２) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: Ai———试样溶液中待测物的色谱峰面积; ρsi———标准溶液中待测物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); Asi———标准溶液中待测物的色谱峰面积. 试样中姜黄素含量w为CurⅠ、CurⅡ、CurⅢ的含量之和,按公式(３)计算. w＝wcurⅠ＋wcurⅡ＋wcurⅢ (３) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 测定结果以平行测定的算术平均值表示,保留３位有效数字. １０　精密度 在重复性条件下,两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的１０％. ３NY/T４８４１—２０２５ 附　录　A (资料性) 姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素混合标准溶液液相色谱图 　 姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素混合标准溶液的液相色谱图见图A􀆰１. 标引序号说明: １———双脱甲氧基姜黄素(CurⅢ); ２———脱甲氧基姜黄素(CurⅡ); ３———姜黄素(CurⅠ). 图A􀆰１　姜黄素混合标准溶液(１０μg/mL)液相色谱图 ４