2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 农 药 产 品 中 有 效 成 分 定 性 筛 查 高 效 液 相 色 谱 法 2 3 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 0 0 C C S G 4 8 1 0 — 2 0 2 5 Q u a l i t a t i v e s c r e e i n g o f a c t i v e i n g r e d i e n t s i n p e s t i c i d e p r o d u c t s — H i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４８１０—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:河北省农药检定监测总站、农业农村部农药检定所、伊萌检测技术服务有限公司、河 北拓测检测服务有限公司. 本文件主要起草人:王雪娟、吴进龙、谷红玲、闫帅帅、马涛、王天骄、刘莹、王文卓、董丽娟、张玉强、 牛海林、赵国存、刘东晓、王之光、郝春秀、唐甜绮、宋红英、刘畅、张丽菲、刘志清、刘春洋、罗晓苹、高倩. ⅠNY/T４８１０—２０２５ 农药产品中有效成分定性筛查高效液相色谱法 １　范围 本文件描述了采用高效液相色谱法定性筛查５２２种农药成分的检测技术. 本文件适用于农药相关产品中有效成分的定性筛查. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样用混合溶剂溶解、稀释,以邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二丁酯为内标物,梯度洗脱高效液相 色谱法测定,以农药成分保留时间比和紫外光谱图定性筛查. ５　试验材料 除非另有说明,在分析中仅使用确认为色谱纯的试剂和符合GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰１　甲醇(CH３OH,CAS号:６７Ｇ５６Ｇ１). ５􀆰２　乙腈(CH３CN,CAS号:７５Ｇ０５Ｇ８). ５􀆰３　混合溶剂:ψ(甲醇∶乙腈)＝５０∶５０. ５􀆰４　邻苯二甲酸二甲酯(C１０H１０O４,CAS号:１３１Ｇ１１Ｇ３):纯度９９􀆰５％. ５􀆰５　邻苯二甲酸二丁酯(C１６H２２O４,CAS号:８４Ｇ７４Ｇ２):纯度９９􀆰５％. ５􀆰６　０􀆰４５μm有机滤膜. ５􀆰７　混合内标溶液:分别准确称取０􀆰５g(精确至０􀆰０００２g)邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二丁酯,于 ５００mL容量瓶中,加入１００mL混合溶剂(５􀆰３)超声溶解,并用混合溶剂(５􀆰３)定容至刻度,混匀. ５􀆰８　农药标样:已知质量分数且不低于９８􀆰０％. ５􀆰９　农药标样溶液:准确称取０􀆰０１g(精确至０􀆰００００２g)农药标样,置于２５mL容量瓶中,准确移取 １０mL混合内标溶液(５􀆰７),再用混合溶剂(５􀆰３)定容至刻度,超声波振荡５min溶解,冷却至室温,混匀. ６　仪器和设备 ６􀆰１　高效液相色谱仪:具有二极管阵列检测器. ６􀆰２　分析天平:感量为０􀆰００００２g和０􀆰０００２g. ６􀆰３　超声波清洗器. ７　测定步骤 ７􀆰１　操作条件 １NY/T４８１０—２０２５ ７􀆰１􀆰１　色谱柱:２５０mm×４􀆰６mm(内径)不锈钢柱,内装C１８、填料５μm填充物(或具等同效果的色 谱柱). ７􀆰１􀆰２　流动相:A:相为ψ(甲醇∶乙腈)＝５０∶５０,B相为水;流动相比例和洗脱时间程序见表１. 表１　流动相比例和洗脱时间程序 序号 时间,min A,％ B,％ 备注 １ ０􀆰０１~５􀆰００ ２０ ８０ ２ ５􀆰０１~９􀆰００ ４０ ６０ ３ ９􀆰０１~１２􀆰００ ６０ ４０ ４ １２􀆰０１~２０􀆰００ ７０ ３０ ５ ２０􀆰０１~２８􀆰００ ８０ ２０ ６ ２８􀆰０１~４２􀆰００ ９０ １０ ７ ４２􀆰０１~４３􀆰００ ６０ ４０ ８ ４３􀆰０１~５０􀆰００ ２０ ８０ ７􀆰１􀆰３　流速:０􀆰８mL/min. ７􀆰１􀆰４　柱温:室温(温度变化应不大于２℃). ７􀆰１􀆰５　检测波长:２４５nm. ７􀆰１􀆰６　进样体积:１０μL. ７􀆰１􀆰７　保留时间(min):氟吡呋喃酮约１３􀆰５９８、邻苯二甲酸二甲酯约１５􀆰３８３、邻苯二甲酸二丁酯约 ２７􀆰４８８. 上述操作参数是典型的,可根据不同仪器特点,对给定的操作参数作适当调整,以期获得最佳效果. ７􀆰２　试样制备 ７􀆰２􀆰１　内标物空白溶液的制备 移取１０mL混合内标溶液于２５mL容量瓶中,用混合溶剂定容至刻度,混匀. ７􀆰２􀆰２　空白试样溶液的制备 称取试样０􀆰１g(已知物可根据农药标签示值适量称取),置于２５mL容量瓶中,准确移取１０mL混合 内标溶液,再用混合溶剂定容至刻度,超声波振荡５min溶解,冷却至室温,混匀. ７􀆰２􀆰３　试样溶液的制备 称取试样０􀆰１g(已知物可根据农药标签示值适量称取),置于２５mL容量瓶中,准确移取１０mL混合 内标溶液,再用混合溶剂定容至刻度,超声波振荡５min溶解,冷却至室温,混匀. 对特殊制剂,因混合溶剂影响溶解和提取农药成分的,可先加入适当体积的水进行破乳分散后,再用 上述方法进行制备.如微囊悬浮剂等. ７􀆰３　测定 在上述操作条件下,待仪器稳定后,连续注入数针标样溶液,直至相邻两针农药成分与内标物的保留 时间比相对变化小于１􀆰５％后,按照标样溶液、标样溶液、试样溶液、试样溶液的顺序进行测定.同时,做 空白测定. ７􀆰４　计算 农药成分与内标物保留时间比γ１按公式(１)计算. γ１＝t测１ t内１(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: γ１———试验测定中农药成分与内标物的相对保留时间之比; t测１———试验测定中农药成分的相对保留时间,单位为分钟(min); t内１———试验测定中内标物的相对保留时间,单位为分钟(min). 因农药成分最大吸收波长不同,查看其保留值时,可根据实际情况,分别选取２１０nm、２７０nm等确定 ２NY/T４８１０—２０２５ 其保留时间. 查询未知农药成分保留时间,以农药成分与相对临近的内标物保留时间折算. 试样溶液的谱图扣除空白溶液谱图,剩余的色谱峰作为可疑峰进行筛查. ８　检索数据库 ８􀆰１　未知物检索程序 通过上述筛查方法,得到未知物与内标物的液相色谱保留值比,查询定性筛查数据库(见附录A、附录 B),获取农药成分筛查范围;利用紫外光谱图(见附录C)和植保知识缩小筛查范围,再使用农药标样进一 步确证农药成分. 注:附录A、附录B分别为高效液相色谱法采用不同仪器、不同色谱柱建立的保留时间定性筛查数据库,附录C为采用 二极管阵列检测器检测获取的农药成分紫外光谱图. ８􀆰２　保留时间确证 利用上述操作条件测得的试样样品的保留时间比值,对应查找农药成分保留时间比值对应信息数据 库,锁定t±２min,γ±０􀆰３范围内的农药成分.再按８􀆰３进行. ８􀆰３　紫外光谱图确证 经８􀆰２初步确证的多种农药成分,查找对应的农药成分紫外光谱图对应信息数据库.对锁定的疑似 农药成分,再按８􀆰４进行. ８􀆰４　辅助信息确证 经上述确定为疑似的农药成分,利用植保信息、外观等理化特性,结合产品标签标注信息和使用特点, 进一步判定是否含有该农药成分.对确证的农药成分再按８􀆰５进行. ８􀆰５　利用农药标样确证 对经过上述方法确证的农药成分,按５􀆰９配制对应的农药标样溶液进行比对确证.确证为某种农药 成分的,查找相应国家标准、行业标准或文献资料,根据文献资料中检测方法,称取适量农药标样和样品, 配制标样和试样溶液,进一步确定农药成分并定量测定. ８􀆰６　农药成分验证 必要时,对按８􀆰５筛查确认的农药成分,再借助气相色谱法、气质联用法、液质联用法等,进一步验证 所确定农药成分的可靠性. ３NY/T４８１０—２０２５ 附　录　A (资料性) 农药成分保留值信息数据库 　 表A􀆰１给出了文件中农药成分保留值信息数据库[C１８不锈钢色谱柱,２５０mm×４􀆰６mm(内径),内 装Eclipseplus①C１８,５μm填充物)]. 表A􀆰１　文件中农药成分保留值信息数据库 序号 农药名称农药成分和内标物保留时间 min农药成分与内标物保留值比 农药成分 保留时间邻苯二甲 酸二甲酯邻苯二甲 酸二丁酯农药成分与 邻苯二甲酸 二甲酯保留 值比农药成分与 邻苯二甲酸 二丁酯保留 值比检测波长/ 最大吸收波长 nm １调环酸钙 ２􀆰３３３ １８􀆰２００ ３２􀆰５８１０􀆰１２８２０􀆰０７１６ ２７３ ２双丙氨膦钠 ２􀆰４２２ １８􀆰３７２ ３３􀆰６６００􀆰１３１８０􀆰０７２０ ２１０ ３磺草灵 ２􀆰４６０ １８􀆰４１６ ３３􀆰６８７０􀆰１３３６０􀆰０７３０ ２５６ ４威百亩 ２􀆰４９７ １８􀆰３０４ ３３􀆰３７４０􀆰１３６４０􀆰０７４８２０５２５０２８３ ５氯丙嘧啶酸 ２􀆰５３１ １８􀆰３２０ ３３􀆰０６１０􀆰１３８２０􀆰０７６６２３０２８３