ICS 11.220 CCS B 41 团体标准 T/CVMA 365—2026 本尼登虫病诊断技术 Diagnostic techniques for benedeniasis 2026 - 4 - 1发布 2026 - 4 - 1实施 中国兽医协会 发布 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 中国兽医协会 CVMA全国团体标准信息平台 T/CVMA 365—2026 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 广州双螺旋基因技术有限公司 和华南农业大学 共同提出。 本文件由中国兽医协会归口。 本文件起草单位：广州双螺旋基因技术有限公司 、华南农业大学 。 本文件主要起草人： 石磊、但学明、李言伟、莫泽权、常彦磊、张璜、陈灏挺、孔明慧 。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 中国兽医协会 CVMA全国团体标准信息平台 T/CVMA 365—2026 1 本尼登虫病诊断技术 1 范围 本文件规定了本尼登虫病 （Benedeniasis ）临床检查、样品采集与病原鉴定等诊断技术要求。 本文件适用于本尼登虫病的 检测、诊断和检疫。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 668 2 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 27401 实验室质量控制规范 兽医学检测 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 本尼登虫 Benedenia 本尼登虫属于扁形动物门（ Platyhelminthes ） ，单殖吸虫纲（ Monogenea ） ，分室科（ Capsalidae ）， 本尼登虫亚科（ Benedeniinae ）虫体呈椭圆形，背腹扁平，长度为 5.4 mm ~ 6.6 mm，最长的可达 11.6 mm， 宽度为 3.1 mm ~ 3.9 mm。 3.2 本尼登虫病 Benedeniasis 由本尼登虫感染海水鱼类引起的疾病，患病鱼 食欲不振， 体型消瘦，严重感染时，食欲废绝 ，生长 发育受阻 。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 实时荧光 PCR：实时荧光聚合酶链式反应（ Real-time polymerase chain reaction ） Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环数（ Cycle threshold ） DNA：脱氧核糖核酸（ deoxyribonucleic acid ） Taq酶： Taq DNA 聚合酶（ Taq DNA ploymerase ） 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 365—2026 2 5 临床诊断 5.1 临床特征 5.1.1 患病部位 本尼登虫主要 寄生于鱼的体表以及眼等部位。 5.1.2 主要症状 寄生数量多时，患病鱼体表可见乳白色半透明 的椭圆形虫体；病鱼狂躁不安，游泳异常 ；体表黏液 增多，鱼鳞脱落，引起继发性感染。 5.2 流行特点 5.2.1 易感动物 石斑鱼、真鲷、大黄鱼以及卵形鲳鲹等 海水养殖鱼类 。 5.2.2 流行季节 全年均可发生，主要流行季节为春末、夏初和秋季。 6 样品采集 6.1 一般要求 应按照 GB/T 2740 1的相关要求进行采样。 具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员操作 。整 个采样期间， 应佩戴手套，样本彼此独立， 避免交叉污染。 每份样本应标记编号、动物种类、品种、采 样时间、采集地点等 信息。 6.2 采样要求 选择符合 5.1临床症状 的患病鱼 。 6.3 采集部位和样品 采集患病鱼体表的虫体。 7 初步判定 7.1 若发现有鱼体符合 5.1.2时，取体表 乳白色半透明 的椭圆形的虫体，显微镜下可见 虫体为前固着器 呈吸盘状，具两对眼点；后固着器不分隔，但具有三对形态各异的中央大钩；咽部表面平滑或呈锯齿状 （参见附录 A图A.1），可判定为可疑 。 7.2 当发现可疑病鱼时，需继续观察或采样进行 分子鉴定。 8 实时荧光 PCR反应 8.1 设备和器械 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 365—2026 3 8.1.1 水浴锅或金属浴。 8.1.2 普通冰箱。 8.1.3 显微镜。 8.1.4 荧光定量 PCR仪。 8.1.5 微量可调移液器及配套吸头 （1 μL ~ 2.5 μL，0.5 μL ~ 10 μL，10 μL ~ 100 μL，100 μL ~ 1000 μL）。 8.2 材料和试剂 8.2.1 除非另有说明，检测中所用试剂均为分析纯，试验用水符合 GB/T 6682 的要求。 8.2.2 水生动物病原体基因组提取试剂盒。 8.2.3 荧光 PCR反应液：按照不同的实时荧光 PCR平台的说明书选取推荐的荧光 PCR扩增试剂。 8.2.4 引物和探针：参照 本尼登虫 ITS特异性基因片段（序列见 附录 B中B.1） ，设计本尼登虫荧光 PCR扩增特异性引物及探针序列，见附录 C。 8.2.5 阳性对照 ：含有本尼登虫 ITS基因片段的重组质粒按照附录 B中B.2制备，也可以使用其他经 过确认的阳性质控品 。 8.2.6 阴性对照 ：已被确认为未感染本尼登虫的阴性样品。 8.2.7 空白对照：超纯水 。 8.3 实时荧光 PCR操作 8.3.1 样品 DNA提取 在核酸提取区进行。 取鱼体表的虫体 ，使用商品化的 核酸提取试剂盒 进行提取。 8.3.2 实时荧光 PCR反应体系 反应体系的配制应在专门的区域进行，反应体系的配制见附录 D中表 D.1。 8.3.3 实时荧光 PCR反应程序 实时荧光 PCR反应程序见附录 D.2。 8.4 结果判定 8.4.1 试验成立条件 当阳性对照的 FAM检测通道有典型的 S型扩增曲线且 Ct值≤ 30，阴性对照和空白对照的 FAM检 测通道均无扩增曲线且 Ct≥40或者无值时，试验成立；否则试验无效。 8.4.2 结果判定 8.4.2.1 阳性 被检样品 FAM检测通道出现典型的 S型扩增曲线，且 Ct值≤ 36，判定为本尼登虫核酸阳性。 8.4.2.2 阴性 被检样品 FAM检测通道 Ct值>40或无 Ct值，未见的S型扩增曲线， 判定为本尼登虫核酸阴性。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 365—2026 4 8.4.2.3 可疑 被检样品 FAM检测通道 36<Ct值<40，判定为可疑，可疑样品需 重新进行一次检测。如重新检测 后仍出现上述结果，可判定为阳性；如重复检测后无 Ct值或者无 “S”型扩增曲线，可判定为阴性。 9 综合判定 9.1 如果在淡水浸泡病鱼后的水体中观察到疑似虫体，则判定为可疑。 9.2 如观察到 符合 7中的疑似虫体，并用实时荧光 PCR方法检测呈阳性，则可确诊为 本尼登虫 。病鱼 同时符合 5.1中的症状，则确诊为 本尼登虫 病。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台