ICS07.140 CCSA92 中华人民共和国公共安全行业标准GA GA/T2335—2025 法庭科学人类线粒体DNA-SNP位点 等位基因特异性扩增检验方法 Forensicsciences—ExaminationmethodsforSNPslocatedonthehuman mitochondrialDNAbyallele-specificPCR 2025-09-01实施 2025-03-14发布 中华人民共和国公安部 发布GA/T2335—2025 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由公安部刑事侦查局提出。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会（SAC/TC179）归口。 本文件起草单位：公安部鉴定中心、上海市公安局、辽宁省公安厅、昌吉回族自治州公安局。 本文件主要起草人：凃政、刘亚楠、叶健、周怀谷、陈荣华、谢群、刘锋、李永久、马温华、赵蕾、 张广峰、陈静、王亚萍、彭柱、丁光树、袁丽萍、郝思静、杨帆。GA/T2335—2025 1法庭科学人类线粒体DNA-SNP位点等位基因特异性扩增检验方法 1范围 本文件描述了法庭科学领域基于毛细管电泳平台使用等位基因特异性扩增进行人类线粒体 DNA-SNP检验的技术方法。 本文件适用于法庭科学领域专业技术人员进行人类线粒体DNA-SNP检验和分析。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T27025—2019检测和校准实验室能力的通用要求 GB/T43635—2024法庭科学DNA实验室检验规范 GA/T1704—2019法庭科学DNA实验室质量控制规范 GA/T1972—2021法医物证检验术语 GA/T1979—2022法庭科学线粒体DNA二代测序技术规范 3术语和定义 GA/T1972—2021界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 线粒体DNAmitochondrialDNA；mtDNA 人类细胞核外DNA，独立存在于细胞质内，呈闭环双链结构，约有16569个碱基对；不遵循孟德 尔遗传定律，表现为母系遗传，通过卵细胞将其中的遗传信息传递给后代；无有丝分裂和减数分裂的 周期变化；遗传物质位于细胞器内，不受核移植的影响；单个细胞中mtDNA拷贝数多，存在异质性现 象。 [来源：GA/T1979—2022，3.1] 3.2 单核苷酸多态性singlenucleotidepolymorphism；SNP 基因组中特定部位单个碱基序列的变异引起的DNA序列多态性。 [来源：GA/T1972—2021，3.16] 3.3 等位基因特异性扩增allele-specificPCR；AS-PCRGA/T2335—2025 2一种利用引物与模板之间的碱基错配有效的抑制非目标片段，扩增目标片段以达到SNP检测的方 法。 3.4 异质性heteroplasmy 当两种或两种以上的mtDNA序列存在于同一个细胞、组织或个体时称为异质性。 注：可分为长度异质性和点异质性，常见于以下两种情况：（1）同一个体在同一组织检出不同的mtDNA序列； （2）同一个体在不同的组织检出不同的mtDNA序列。 [来源：GA/T1979—2022，3.2] 4原理 将检材/样本制备成待测样品，通过AS-PCR扩增技术即设计三条引物，其中一条为下游（或上游） 通用引物，另外两条为上游（或下游）特异性平行引物，引物3’端的碱基分别配对于SNP位点，在严 格的扩增条件下进行PCR反应，然后应用荧光标记和毛细管电泳平台对mtDNA-SNP位点进行检测。 5仪器和试剂 5.1通则 按照GB/T27025—2019中的6.4执行。 5.2仪器 仪器包括： a）全自动荧光分析仪； b）PCR扩增仪； c）离心机； d）移液器； e）恒温加热器。 5.3试剂 试剂包括： a）DNA提取和纯化试剂； b）基于等位基因特异性扩增检验方法的mtDNA-SNP试剂盒； c）电泳试剂。 6检验方法 6.1通则 检验流程应符合相应试剂说明书和仪器操作规范要求，并进行方法验证，制定相应的作业指导书， 内容应包括： a）检验步骤：至少包括DNA提取和纯化、PCR扩增、电泳分析等； b）质量控制：至少包括设置阳性对照和阴性对照、污染防控、电泳分析结果质量评价、结果评