ICS 67.050 CCS X 16 团体 标准 T/STIC 130032—2026 乳及乳制品中维生素 K₁和K₂含量的测定 高效液相色谱法 Determination of Vitamin K₁ and K₂ in Milk and Dairy Products High Performance Liquid Chromatography 2026 - 03 - 16发布 2026 - 03 - 16实施 上海市检验检测认证协会 发布 全国团体标准信息平台 T/STIC 130032 —2026 I 目次 前 言 ................................ ................................ ............ II 1 范围 ................................ ................................ ................. 3 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .......3 3 术语和定义 ................................ ................................ ........... 3 4 方法原理 ................................ ................................ ............. 3 5 试剂和材料 ................................ ................................ ........... 3 6 仪器与设备 ................................ ................................ ........... 5 7 测定分析 ................................ ................................ ............. 5 8 分析结果的表述 ................................ ................................ .......6 9 精密度 ................................ ................................ ............... 7 10 检出限及定量限 ................................ ................................ ......7 附录 A ................................ ................................ ............ 8 全国团体标准信息平台 T/STIC 130032 —2026 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由上海市检验检测认证协会提出并归口。 本文件由上海市检验检测认证协会发布。 本文件起草单位：内蒙古蒙牛乳业（集团 )股份有限公司、上海市质量监督检验技术研究院、青岛 海关技术中心、微谱北方检测认证（山东）有限公司、内蒙古欧世蒙牛乳制品有限责任公司、上海微谱 检测认证有限公司、内蒙古特康瑞营养食品有限责任公司、现代牧业（集团）有限公司。 本文件主要起草人：逯刚、潘思奕、赵玉然、董立雅、李秋琴、唐亚娟、黄文强、张琳、吴腾、毕 春波、李俊楠、李昊哲、闫良、梁凤玲、马利军、刘一峰、李雪晶、刘天益、高雪梅、王美华 。 首次承诺执行单位：内蒙古蒙牛乳业（集团 )股份有限公司、上海市质量监督检验技术研究院、青 岛海关技术中心、微谱北方检测认证（山东）有限公司、内蒙古欧世蒙牛乳制品有限责任公司、上海微 谱检测认证有限公司、内蒙古特康瑞营养食品有限责任公司、现代牧业（集团）有限公司。 全国团体标准信息平台 T/STIC 130032 —2026 3 乳及乳制品中维生素 K1和K2含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了乳及乳制品中维生素 K1和K2含量的测定方法。 本文件适用于乳及乳制品中发酵乳、调制乳、乳粉、干酪、炼乳等维生素 K1及维生素 K2三种分型即 四烯甲萘醌、七烯甲萘醌、九烯甲萘醌含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法原理 样品经脂肪酶或淀粉酶酶解，采用正己烷提取试样中的维生素 K1和K2三种分型，提取液浓缩后经 反相液相色谱分离，锌还原柱柱后还原，荧光检测器检测，外标法定量。 5 试剂和材料 除另有规定外， 均使用分析纯试剂 。 5.1 试剂 本方法所用水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1.1 甲醇：色谱纯。 5.1.2 异丙醇：色谱纯。 5.1.3 无水乙醇。 5.1.4 无水碳酸钾。 5.1.5 磷酸二氢钾。 5.1.6 正己烷：色谱纯。 全国团体标准信息平台 T/STIC 130032 —2026 4 5.1.7 四氢呋喃：色谱纯。 5.1.8 冰乙酸。 5.1.9 氯化锌。 5.1.10 无水乙酸钠。 5.1.10 氢氧化钠。 5.1.12 脂肪酶(CAS号：9001-62-1)：酶活力≥ 700 U/mg 。 5.1.13 淀粉酶(CAS号：9000-92-4)：酶活力≥ 1.5 U/mg 。 5.2 试剂配制 5.2.1 甲醇异丙醇溶液（ 1+1）：量取 50mL甲醇与50mL异丙醇混合，摇匀。 5.2.2 氢氧化钠溶液（ 40%）：称取 40.0g氢氧化钠，用水溶解，冷却，稀释至 100mL。 5.2.3 磷酸盐缓冲液 (pH8.0)：溶解54.0g磷酸二氢钾于 300mL水中，用 40%氢氧化钠溶液调节 pH至 8.0，加水至 500mL。 5.2.4 流动相：量取甲醇 900mL，四氢呋喃 100mL，冰乙酸 0.3mL，混匀后，加入氯化锌 1.5g，无水乙 酸钠0.5g，超声溶解， 0.2um滤膜过滤。 5.3 标准品 5.3.1 维生素K1:纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质， CAS号：84-80-0。 5.3.2 维生素K2(四烯甲萘醌， MK-4):纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质， CAS 号：863-61-6。 5.3.3 维生素K2(七烯甲萘醌， MK-7):纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质， CAS 号：2124-57-4。 5.3.4 维生素K2(九烯甲萘醌， MK-9):纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质， CAS 号：523-39-7。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 维生素K1标准储备液（ 400μg/mL）：准确称取维生素 K1标准品适量（精确至 0.1mg）于小烧杯 中，用甲醇溶解定容至 10mL容量瓶中，储备液在 -20℃以下避光条件下保存，保存期 2个月。 5.4.2 MK -4标准储备液（ 400μg/mL）：准确称取 MK-4标准品适量（精确至 0.1mg）于小烧杯中，用甲 醇溶解定容至 10mL容量瓶中，储备液在 -20℃以下避光条件下保存，保存期 6个月。 5.4.3 MK -7标准储备液（ 400μg/mL）：准确称取 MK-7标准品适量（精确至 0.1mg）于小烧杯中，用甲 醇异丙醇溶液（ 1+1）定容至 10mL容量瓶中，超声 10min，储备液在 -20℃以下避光条件下保存，保存 期6个月。 5.4.4 MK -9标准储备液（ 400μg/mL）：准确称取 MK-9标准品适量（精确至 0.1mg）于小烧杯中，用甲 醇异丙醇溶液（ 1+1）定容至 10mL容量瓶中，超声 10min，储备液在 -20℃以下避光条件下保存，保存 全国团体标准信息平台 T/STIC 130032 —2026 5 期6个月。 注：MK-7、MK-9低温高浓度时易过饱和，出现浑浊，可在使用前超声至完全溶解，恢复室温使用，仍出现浑浊可直 接用异丙醇配制。 5.4.5 维生素K1和K2混合标准中间液（ 4μg/mL）：准确移取 100μL维生素K1和K2标准储备液，用 甲醇稀释至 10mL，临用现配