ICS67.060 CCSX83 WSJD 中国卫生监督协会团体标准 T/WSJD99—2025 红曲类保健食品中米酵菌酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determinationofbongkrekicacidinredyeastfunctionalfood Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod 2025-11-26发布 2025-11-27实施 中国卫生监督协会发布  全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/WSJD99—2025 I目次 前言..................................................................................II 1范围.................................................................................1 2规范性引用文件.......................................................................1 3术语和定义...........................................................................1 4原理.................................................................................1 5试剂和材料...........................................................................1 6仪器和设备...........................................................................2 7试样制备与保存.......................................................................2 8测定.................................................................................2 9分析结果的表述.......................................................................4 10精密度...............................................................................4 11检出限和定量限......................................................................4 附录A（资料性）米酵菌酸标准溶液多反应监测质量色谱图....................................5 全国团体标准信息平台 T/WSJD99—2025 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国卫生监督协会提出并归口。 本文件起草单位：浙江省疾病预防控制中心、国家食品安全风险评估中心、北京市顺义区计量和食 品药品检测中心。 本文件主要起草人：徐小民、郭垣、安雨馨、蒋定国、张晓梅、沈海涛、潘晓东、蔡增轩、徐美佳、 许娇娇、韩见龙。 全国团体标准信息平台 T/WSJD99—2025 1红曲类保健食品中米酵菌酸的测定液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本文件规定了红曲类保健食品中米酵菌酸的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于红曲类保健食品、红曲酒、红曲米中米酵菌酸含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样中的米酵菌酸经氨化甲醇水溶液超声提取、混合型强阴离子交换固相萃取小柱净化，采用液相 色谱-质谱/质谱仪检测，同位素内标法定量。 5试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。 5.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。 5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。 5.1.4甲酸铵（HCOONH4）：色谱纯。 5.1.5氨水（NH3•H2O）：≥25%。 5.2试剂配制 5.2.11%氨水-80%甲醇水溶液：量取80mL甲醇，加入1.0mL氨水，加水稀释至100mL，混匀。 5.2.21%甲酸-甲醇溶液：吸取1.0mL甲酸，加甲醇稀释至100mL，混匀。 5.2.31mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸水溶液：准确称取63.0mg甲酸铵，用100mL水溶解，加入1.0mL甲 酸，用水稀释至1000mL，混匀。 5.2.4乙腈-水溶液（1:1）：将乙腈和水等体积混匀。 5.3材料 5.3.1混合型强阴离子交换固相萃取小柱：60mg/3mL。 5.3.2微孔滤膜：0.22μm有机系滤膜。 5.4标准品 5.4.1米酵菌酸（C28H38O7，CAS号：11076-19-0）标准溶液：100µg/mL，或经国家认证并授予 标准物质证书的标准物质。 5.4.2米酵菌酸-13C28同位素（13C28H38O7）内标溶液：5µg/mL，或等效内标。 全国团体标准信息平台 T/WSJD99—2025 25.5标准溶液配制 5.5.1标准储备溶液（10.0µg/mL） 准确吸取标准溶液（5.4.1）1.0mL置于10.0mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成10.0μg/mL 的标准中间液，-18℃及以下保存。有效期12个月。 5.5.2标准中间溶液（1.00µg/mL） 准确吸取标准储备溶液（5.5.1）1.0mL置于10.0mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成1.00μg/mL 的标准中间液，-18℃及以下保存。有效期3个月。 5.5.3标准使用溶液I（100ng/mL）和标准使用溶液II（10ng/mL） 准确吸取标准中间溶液（5.5.2）1.0mL置于10.0mL容量瓶中，用乙腈-水溶液（1:1）（5.2.4） 定容，配制成100ng/mL的标准使用溶液I；准确吸取1.0mL标准使用溶液I置于10.0mL容量瓶中，用乙 腈-水溶液（1:1）（5.2.4）定容，配制成10.0ng/mL的标准使用溶液II。临用现配。 5.5.4同位素内标使用溶液（500ng/mL） 准确吸取米酵菌酸同位素内标溶液（5.4.2）1.0mL置于10.0mL容量瓶中，用乙腈-水溶液（1:1） （5.2.4）定容，配制成500ng/mL的标准使用溶液。有效期3个月。 5.5.5标准系列工作溶液 准确吸取标准使用溶液II（5.5.3）20.0µL、50.0µL、200µL，及标准使用溶液I（5.5.3）100µL、 200µL，每个浓度点均加入20.0µL内标使用液（5.5.4），用乙腈-水溶液（1:1）（5.2.4）定容至1.0 mL，制成浓度分别为0.20、0.50、2.0、10.0、20.0ng/mL的标准系列工作溶液，其中内标浓度为10.0ng/mL。 临用现配。 6仪器和设备 6.1液相色谱-质谱/质谱联用仪：配有电喷雾离子源。 6.2电子天平：感量0.001g和0.0001g。 6.3离心机：转速不低于8000r/min。 6.4高速粉碎机。 6.5固相萃取装置。 6.6超声波清洗器：30kHz~50kHz。 6.7涡旋混合器。 7试样制备与保存 红曲米等干试样缩分后不少于500g，红曲类保健食品（胶囊需要去掉胶囊壳）不少于100g，经高 速粉碎机粉碎均匀；红曲酒等液体样品适当排气后混合均匀。储存于样品瓶中备用，于-18℃及以下冷 冻保存。 8测定 8.1试样处理 8.1.1试样提取 红曲类保健食品、红曲米等固体试样：准确称取约1g试样（精确至0.001g）于10mL离心管中， 加入1%氨水-80%甲醇水溶液5mL，涡流振荡提取20min，再超声提取30min，于8000rpm离心5min， 准确移取400µL上清液，加入1%氨水-80%甲醇水溶液2mL、内标使用液40.0µL，涡流混匀后待净化。 红曲酒等液体试样：准确称取约1g试样（精确至0.001g）于10mL离心管中，加入1%氨水-80%甲 醇水溶液2mL、内标使用液40.0µL，充分涡流混匀，于8000rpm离心5min，提取液待净化。 全国团体标准信息平台 T/WSJD99—2025 38.1.2试样净化 固相萃取小柱临用前依次用3.0mL甲醇和3.0mL水活化，保持柱体湿润。 将待净化液转移到经活化平衡的固相萃取小柱中，以约1滴/s的流速，依次用3mL水和3mL甲醇淋 洗，弃去流出液，再用2.00mL1%甲酸-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，经0.22μm微孔滤膜过滤后待测。 8.2仪器参考条件 8.2.1液相色谱参考条件 a)色谱柱：C18色谱柱（柱长150mm，柱内径3.0mm，填料粒径2.5μm）或性能相当者； b)流动相：A为1m