ICS 11.220 CCS B 41 团体标准 T/CVMA 359—2026 灵芝菌丝体粉剂 液体发酵 Ganoderma lucidum mycelium powder—liquid fermentation 2026 - 3 - 4发布 2026 - 3 - 4实施 中国兽医协会 发布 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 中国兽医协会 CVMA全国团体标准信息平台 T/CVMA 359—2026 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 内蒙古民族大学提出。 本文件由 中国兽医协会 归口。 本文件起草单位： 内蒙古民族大学、云南农业大学 。 本文件主要起草人： 孙树民、郭海霞、李文贵、毕峻龙、曲伟杰、尹革芬、张天雨 。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 中国兽医协会 CVMA全国团体标准信息平台 T/CVMA 359—2026 1 灵芝菌丝体粉剂 液体发酵 1 范围 本文件规定了灵芝菌丝体粉剂（液体发酵）的术语和定义、生产环境、菌种选择、生产流程、仪器 与设备、发酵技术 管理、菌丝体粉剂制作和灵芝菌丝体粉剂质量标准等技术要求。 本文件适用于灵芝菌丝体粉剂（液体发酵）的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定 两层筛筛分法 GB/T 19424 天然植物饲料原料通用要求 GB 5007 3 洁净厂房设计规范 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 液体发酵 liquid fermentation 是在发酵罐或摇瓶 中添加碳源、氮源、无机盐、维生素等营养物质组成的液体培养基，模拟自然生 长状态下菌种所需的营养、温度、 pH等条件，实现培养增殖，在获得菌丝体、次生代谢物等。 3.2 灵芝液体发酵 liquid fermentation of Ganoderma lucidum 通过发酵罐或摇瓶培养 灵芝菌丝体，在适宜的培养条件下内获得 灵芝菌丝体及次生代谢物的过程， 该生产方法具有产量大、缩短生产周期和效益高等特点 。 3.3 灵芝菌丝体 Ganoderma lucidum mycelium 指灵芝菌种在发酵罐或摇瓶等容器经 液体发酵过程 ，获得的灵芝菌丝体及其次生代谢物。其含有灵 芝多糖、三萜类、酚类等生物活 性成分。 3.4 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 359—2026 2 液体发酵 阶段 liquid fermentation phase 共分为 3级培养，分为一级菌种即平板培养或试管培养、 二级菌种即摇瓶培养扩增 ，二级菌种 接种 到发酵罐培养。 4 生产环境 灵芝菌丝体粉剂（液体发酵）生产环境 应符合 GB 50073 的相关要求。 5 菌种选择 选用在摇瓶培养条件下，菌丝体相互缠绕、聚集 、均匀、高产 和遗传稳定性好的形成的颗粒结构 的 菌球作为发酵 菌种：黑灵芝 CH403。 6 生产流程 食用菌菌种 的生产应符合 NY/T 528 的要求。 灵芝菌丝体粉剂（液体发酵） 依以下流程进行生产和 收集，具体生产流程见附录 B： 原始菌种→复壮→接种平板培养→平板菌块→接种摇瓶扩增→发酵罐高温灭菌→接种→发酵罐培 养→液体发酵物收集。 7 原料与设备 7.1 原料 7.1.1 所用原料应符合 GB/T 19424 的要求。 7.1.2 可溶性淀粉 2 %、大豆粉 1.8 %、磷酸二氢钾 0.3 %、硫酸镁 0.1 %、维生素 B1 0.005 %、纯水。 7.1.3 辅料（膨润土、玉米淀粉、玉米芯粉）。 7.1.4 发酵培养基（ 见附录 A中A.1）。 7.1.5 Sevage溶液（见附录 A.2）。 7.2 仪器设备 及要求 7.2.1 烘干机、培养皿、光照培养箱、 500 mL摇瓶、 4 ℃冰箱、 120 L发酵罐、 0.45 µ m滤膜。 7.2.2 排列有序 ，使生产作业顺畅进行并避免引起交叉污染。 7.2.3 用于测定、控制或记录的测量器和记录仪 ，应能充分发挥其功能且应准确 ，并定期校准。 7.2.4 与原料、半成品、成品接触的设备与用具 ,应使用无毒、无味、抗酸腐蚀、不易脱落的材料制作 , 并应易于清洁和保养。 7.2.5 应建立设备保养和维修制度 ，加强设备的日常维护和保养 ，定期检修 ，及时记录。 8 灵芝液体 发酵 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 359—2026 3 8.1 平板培养（一级菌种） 500 mL无菌摇瓶装 300 mL培养基，挑取并接种约 1 cm2的平板菌种 2块，28 ℃、160 r/min培养 7 d，挑取 6瓶生长状态良好、培养基略清澈且呈淡黄色的菌种作为发酵罐种子培养液。 8.2 摇瓶培养（二级菌种） 500 mL无菌摇瓶装 300 mL培养基，挑取并接种约 1 cm2的平板菌种 2块，28 ℃、160 r/min 培养 7 d，挑取 6瓶生长状态良好、培养基略清澈且呈淡黄色的菌种作为发酵罐种子培养液。 8.3 发酵罐培养 发酵罐培养，按以下流程进行： a) 120 L发酵罐加水 80 L，加热至沸腾、灭菌； b) 冷却后加培养基，充分搅拌混匀，补水至 100 L刻度线处，封口； c) 115 ℃灭菌 60 min； d) 循环保温管口处通入冷凝水，降温至 28 ℃，关闭循环保温管口，待用。取 8 瓶摇瓶菌种，采 用火圈接菌法于接菌口快速接入发酵罐，关闭接菌口； e) 28 ℃、通气量 0.04 vvm 连续培养约 8 d。 注：发酵罐的培养温度应控制在 28 ℃ ± 2 ℃，压力应维持在安全范围内。 8.4 出液 打开发酵罐底端出液口，收集全部发酵液 。 8.5 菌丝体 将上述发酵液过 200目筛，蒸馏水洗涤 5次，获得菌丝体。 9 灵芝菌丝体粉剂制作 9.1 辅料混合 将发酵液与膨润土、玉米淀粉、玉米芯粉辅料按照重量 0.94:0.2:0.2:0.2比例混合，搅拌均匀，手握 至松软团状。 9.2 烘干粉剂 将上述原料摊平于不锈钢托盘，高度约 2 cm，置于 45 ℃烘干机烘干至水分 ≤5 %为合格。 10 灵芝菌丝体粉剂质量 标准 10.1 粉剂外观 取烘干粉剂适量置于光滑纸上，将其表面轻轻铺平，在光线明亮处观察其外观形态，应色泽均匀， 无花纹与色斑。 粉碎粒度测定应符合 GB/T 5917.1 的要求。 10.2 粉剂干燥失重 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 359—2026 4 按照中华人民共和国兽药典（ 2020版）中干燥失重测定法 （附录 0831）进行。结合本灵芝菌丝体 粉剂的特性，规定其干燥失重限度为不得过 8.0 %。根据辅料的性质，选择用干燥剂干燥法，取 3个批 次的粉剂分别称取粉剂 M1，平铺于干燥至恒重的重量为 M2的具塞扁形称量瓶中 ，铺成≤5 mm厚薄 层，瓶盖打开置干燥器内，干燥器底部放置经 105 ℃干燥处理的变色硅胶，放置 48 h，称量称量瓶及粉 剂总重为 M3，干燥失重百分率 按照公式（ 1）进行计算。 N= [M1-(M3-M2)]/M1×100% ………………………………………… （1） 式中： N——干燥失重百分率 ，单位为百分比（ %）； M1——取粉剂样品的质量 ，单位为克（ g）； M2——具塞扁形称量瓶的重量 ，单位为克（ g）； M3——干燥后称量瓶和粉剂的总重量 ，单位为克（ g）。 11 粉剂含量均匀度测定 称取 3个不同批次、同一批次取 3个不同部位样品，分别用纯水溶解并稀释成浓度为 300 µ g/mL 的溶液， 0.45 μm滤膜过滤，取滤液备用，按《中华人民共和国兽药典》（ 2020年版）多糖含量测定法 （0401），以葡萄糖为对照品，测量其粗多糖含量（见附录 C）。 12 灵芝菌丝体粉剂的稳定性试验 灵芝菌丝体粉剂的稳定性试验 包括：高温试验（操作见附录 D中D.1）、高湿度试验（操作见附录 D.2）、强光照射试验（操作见附录 D.3）以及长期试验（操作见附录 D.4）。 13 灵芝菌丝体粉剂（液体发酵）安全性要求 重金属限量（ mg/kg）：砷（ As）≤2.0，铅（ Pb）≤5.0，镉（ Cd）≤0.5。微生物限度：菌落总数 ≤10⁴ CFU/g ，大肠杆菌不得检出。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台