ICS 11.220 CCS B 41 团体标准 T/CVMA 339—2026 犬感染棘球绦虫粪便及其污染牧草样本 采集、处理及检测 技术规范 Technical guidelines for the collection, processing, and detection of fecal samples from dogs infected with Echinococcus spp. and contaminated pasture grass 2026 - 1 - 14发布 2026 - 1 - 14实施 中国兽医协会 发布 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 中国兽医协会 CVMA全国团体标准信息平台 T/CVMA 339—2026 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 新疆医科大学第一附属医院 提出。 本文件由 中国兽医协会 归口。 本文件起草单位： 新疆医科大学第一附属医院，吉林大学，新疆禹孚生物技术有限公司，新疆医科 大学，中农华威制药股份有限公司，新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中 心） ，新疆伊犁州动物疾病控制与诊断中心 。 本文件主要起草人：张文宝、李军、刘明远、刘晓雷、张远利、齐文静、游锡火、丁静、颜明智、 韩振翔、李文涛、张耀、吾力江·卡马力、班万里、刘帅、王雪、吴川川、田梦潇、陈荣贵 。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 339—2026 II 引 言 两种棘球蚴病（包虫病） ，包括细粒棘球蚴病（ CE）和多房棘球蚴病（ AE，“虫癌 ”） ，是典型的兽 源性人兽共患病。分别是由寄生在犬等犬科动物小肠里的细粒棘球绦虫（ Echinococcus granul osus）和 / 或多房棘球绦虫（ Echinococcus multilocularis ）排出的虫卵感染人，家畜和野生动物所致。棘球蚴病控制 的关键点是切断病原循环和对病原在食物链中的感染情况的监测。 通过粪便样本检测犬等犬科动物是否 感染棘球绦虫及其污染牧草 等样本是否有虫卵或虫体组织是评估犬等动物和环境对棘球蚴（包虫）病传 播风险因素的关键考量指标。本标准旨在规范样本采集和测定方法，为制定棘球蚴（包虫）病精细化管 理的控制策略和措施提供依据。 本标准以村为基本单位，采集犬等犬科动物粪便及其污染牧草 等样本，通过 ELISA和PCR技术进 行病原鉴定，探明村庄与感染相关的环境风险因子和流行病学传播途径的关键环节，评估中间宿主（包 括人和牛、羊）被感染的风险，确定棘球蚴（包虫）病的流行级别，指导棘球蚴（包虫）病的防控、环 境消毒和放牧管理措施等。 本规范的制定参考了国际标准及国内相关技术 方案，结合实验室实践经验，旨在为科研机构、疾病 防控部门及兽医诊断实验室提供规范野外采样的采集流程，确保样本的代表性、完整性和可溯性，为后 续分析提供可靠数据基础，推动棘球蚴（包虫）病的科学防控。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 339—2026 1 犬感染棘球绦虫粪便及其污染牧草样本采集、处理与检测 技术规范 1 范围 本文件规定了以村庄为基本单位，采集棘球绦虫犬科动物粪便样本及其污染牧草 等样本，采样材料 与人员准备、样本采集方法、样本处理、检测方法的技术要求。 本文件适用于科研机构、疾病防控部门及兽医诊断实验室 进行各类棘球绦虫样本的采集、处理及阳 性样本的确认。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T 32948 犬科动物感染细粒棘球绦虫粪抗原的抗体夹心酶联免疫吸附试验检测技术 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸（ Deoxyribonucleic Acid ） ELISA：酶联免疫吸附试验（ Enzyme -Linked Immunosorbent Assay ） PCR：聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction ） TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（ Tris Acetate -EDTA Buffer ） 5 样本的采集、保存及运输 5.1 器材 5.1.1 剪刀、镊子、一次性塑料镊子。 5.1.2 自制 PE袋（ 340 mm*120 mm ）、密封塑料袋（ 340 mm*240 mm ）。 5.1.3 50 mL离心管。 5.1.4 医疗废物收集袋。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 339—2026 2 5.1.5 相机。 5.1.6 采样登记本、防水记号笔、签字笔。 5.1.7 一次性 PE手套、无粉乳胶手套或丁腈手套。 5.1.8 医用一次性防护服、一次性医用帽子、医用外科口罩、一次性防护鞋套。 5.1.9 护目镜（或一次性面屏）。 5.2 试剂 5.2.1 75 %乙醇。 5.2.2 含次氯酸钠消毒剂（ 1000 ~ 2000 mg/L ）。 5.3 生物安全要求 5.3.1 总则 生物安全要求按照 GB 19489 的相关规定进行。 5.3.2 采样生物安全要求 样本采集人员进入采样现场前做好个人防护，应包括一次性医用帽子、医用外科口罩、医用一次性 防护服、无粉乳胶手套或丁腈手套、护目镜（或一次性面屏）、一次性防护鞋套。在采样前及结束后， 按规范要求完成个人防护用品的穿脱，同组人员应互相检查个人防护是否符合要求。 5.3.3 实验室生物安全要求 实验操作需在符合生物安全标准的 P2实验室进行，操作人员应经过专业培训并获得授权。实验过 程中，操作人员需佩戴个人防护设备，如一次性手套、口罩、防护服等。实验废弃物应按照生物安全相 关规定进行处理，避免污染环境和造成感染风险。 5.3.4 野外采样现场意外暴露处理 人员暴露出现皮肤污染，清水冲洗 15 min，用 75 %乙醇棉球消毒并进行包扎，更换污染衣物。样 本泄漏时，隔离现场，升级防护（穿防护服等），固体样本用一次性塑料镊子收集，用含次氯酸钠消毒 剂（ 1000 ~ 2000 mg/L ）消毒 30 min以上。废弃物密封包装，带回实验室处理并记录报告。 5.4 采样基本要求、时间及地点 5.4.1 采样基本要求 在棘球蚴（包虫）病流行区，以村庄为基本单位，每乡随机选择不少于 3个自然村采集犬粪便和环 境样本（牧草、蔬菜及水果等） 。 每村犬粪便样本和环境样本分别不少于 10份，样本不足时可以采集邻村相应样本进行补充。 5.4.2 采样时间 春季（ 4 ~ 5月）和秋季（ 9 ~ 10月） 。 5.4.3 采样地点 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 339—2026 3 5.4.3.1 粪便样本采集地点 粪便样本可采集于养犬户，也可以采集流浪无主犬的粪便；或环境中的其他犬科动物粪便。 5.4.3.2 其他环境样本采集地点 其他环境样本采集地点应选择在居民区或居民区附近。 5.5 样本采集 5.5.1 采集方法 调查人员应戴一次性乳胶手套及 PE手套，每次采集应换新手套。 采集新鲜犬粪、 牧草或蔬菜装入犬粪便样本采集管或环境样本采集袋。 每只犬粪便样本量为 10 ~ 20 g，干牧草为 80 g左右，生菜和草莓为 200 ~ 300 g。采集后放入密封塑料袋中密封。 样本管或环境样本采集袋应标明采集的地点（县乡村） 、时间、户主姓名，犬只颜色、大小类型（体 重小于 10 kg为小型犬， 10 ~ 20 kg的为中型犬，大于 20 kg的为大型犬）及样本采集的经纬度，并填写 样本采集记录表（参见附录 E）。 5.5.2 样本保存与运输 5.5.2.1 样本保存 样本采集完成后，要及时做好整理归类，置 4 ℃冰柜暂存不得超过 48 h。样本到达实验室后须经 -80 ℃连续冻存 7天以上，方可进行后续检测工作。 5.5.2.2 样本运输 样本运输须符合国家法律法规要求，运送回实验室时应置于密闭、耐压、冷藏的转运箱中。 运输动物病原微生物菌（毒）种、样本及病料的人员需经生物安全培训并取得资质认证。 6 PCR检测 6.1 仪器设备和耗材 6.1.1 微量可调移液器及配套吸头（ 0.1 μL ~ 2.5 μL，0.5 μL ~ 10 μL，10 μL ~ 100 μL，100 μL ~ 1000 μL）。 6.1.2 漩涡振荡器。 6.1.3 台式低温高速离心机。 6.1.4 高压蒸汽灭菌器。 6.1.