云南省实验动物学会团体标准 T/YALAS020—2025 实验动物羊驼微卫星DNA遗传学检测方法 Laboratoryanimal-DetectionmethodofmicrosatelliteDNAdetectionofgenetic diversityforAlpacas 2026-01-08发布 2026-01-15实施 云南省实验动物学会  发布ICS65.020.30 CCSB44 YALAS 全国团体标准信息平台 T/YALAS020—2025 I目次 前 言............................................................................II 1范围.................................................................................1 2规范性引用文件.......................................................................1 3术语和定义...........................................................................1 3.1实验羊驼......................................................................1 3.2微卫星.........................................................................1 4检测方法.............................................................................1 4.1采样...........................................................................1 4.2微卫星DNA位点.................................................................1 4.3基因组DNA提取.................................................................3 4.4PCR反应体系及扩增条件..........................................................3 4.5PCR扩增产物检测................................................................3 4.6基因分型.......................................................................3 5数据统计分析与结果判定...............................................................4 全国团体标准信息平台 T/YALAS020—2025 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南省实验动物学会提出。 本文件由云南省实验动物学会（YALAS）归口。 本文件起草单位：中国科学院昆明动物研究所、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、云南省实验动 物学会。 本文件主要起草人：吕龙宝、齐瑛琳、于海波、李昌文、张伟、王野、肖文娴、夏长友、陈洪岩、 张飞燕、李倩、孙玉林、赵玲、金洁。 全国团体标准信息平台 T/YALAS020—2025 1实验动物羊驼微卫星DNA遗传学检测方法 1范围 本文件规定了实验羊驼微卫星DNA遗传学检测方法、数据统计分析与结果判定。 本文件适用于实验羊驼遗传质量控制及遗传组成分析等。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T1673畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1实验羊驼laboratoryalpaca 经人工培育，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研 究、教学、生产、检定及其他科学实验的羊驼。 3.2微卫星DNAmicrosatelliteDNA 也称短串联重复序列或简单重复序列，指生物体基因组中由1～6个核苷酸组成的串联重复序列。 不同个体的重复数不同而形成了微卫星DNA的多态性。 4检测方法 4.1采样 实验羊驼外观检查应无异常，核对编号；采集静脉血0.5mL，-20℃低温保存。采样方法应按照NY/T 541进行。 4.2微卫星DNA位点 羊驼微卫星DNA位点的名称、引物序列、等位基因数、PCR反应的退火温度应符合表1规定。 全国团体标准信息平台 T/YALAS020—2025 2表1羊驼微卫星DNA位点 序号名称等位基因（n） 引物序列（5’-3’）等位基因 参考范围（bp）退火温度 （℃） 1LCA56 16 ATGGTGTTTACAGGGCGTTG GCATTACTGAAAAGCCCAGG133-169 58 2 LCA63 14TTACCCAGTCCTTCGTGGG GGAACCTCGTGGTTATGGAA190-254 56 3 LCA65 14TTTTTCCCCTGTGGTTGAAT AACTCAGCTGTTGTCAGGGG165-191 58 4 LCA66 24GTGCAGCGTCCAAATAGTCA CCAGCATCGTCCAGTATTCA220-262 56 5 LCA68 10TCCTGTCTGTGAGAAGGCTG CCGAAGGAAAAATAAAATGGAA191-209 56 6 LCA70 7TTCTGATGTATGGCATAGCGA TGGGGGTAAGAGCAGGATAA211-223 56 7 LCA71 6CAGACATATACCTGTATCCGTATCTA TTCAGTGTTTCCTCGCAATG136-150 56 8 LCA77 15TGTTGACTAGAGCCTTTTCTTCTTT GGGCAAGAGAGACTGACTGG233-263 58 9 YWLL02 6GTGCACTCAGATACCTTCACA TACATCTGCAATGATCGACCC278-290 56 10YWLL07 2CACATGCCTGTTCCCTCTGAT GACAAACCACAAGCATAAACC150-152 58 11YWLL08 13ATCAAGTTTGAGGTGCTTTCC CCATGGCATTGTGTTGAAGAC135-177 60 12YWLL09 9AAGTCTAGGAACCGGAATGC AGTCAATCTACACTCCTTGC154-180 60 13YWLL19 6CTCACAGACCACAGTTCCAGT AAGGTCCATCCATGTTGTCAC137-161 60 14YWLL29 6GAAGGCAGGAGAAAAGGTAG CAGAGGCTTAATAACTTGCAG218-232 56 15YWLL30 3TTAAGGGTTCCCTGTATTTGG AAGCAGGATAGTGGTGGAAGT104-110 58 16YWLL36 7AGTCTTGGTGTGGTGGTAGAA TGCCAGGATACTGACAGTGAT148-166 56 17YWLL38 3GGCCTAAATCCTACTAGAC CCTCTCACTCTTGTTCTCCTC174-178 60 18YWLL40 6CACATGACCATGTCCCCTTAT CCAGTGACAGTGTGACTAAGA180-190 58 19YWLL43 10 ATACCTCTCTTGCTCTCTCTC 131-157 58 全国团体标准信息平台 T/YALAS020—2025 3CCTCTACAACCATGTTAGCCA 20YWLL44 11CTCAACAATGCTAGACCTTGG GAGAACACAGGCTGGTGAATA86-120 58 21YWLL46 5AAGCAGAGTGATTTAACCGTG GGATGACTAAGACTGCTCTGA98-110 56 22YWLL58 6GGCATCTCTTCCTCATCAAT GACATCTCCAACTTGGAATC175-194 56 23YWLL59 10TGTGCAGGAGTTAGGTGTA CCATGTCTCTGAAGCTCTGGA96-136 56 4.3基因组DNA提取 用苯酚氯仿法或试剂盒提取基因组DNA。 4.4PCR反应体系及扩增条件 PCR反应体系如表2所示。 表2PCR反应体系 组分 体积 10×Buffer 2.5μL 2.5mMdNTP 1μL 10μM上游引物 1μL 10μM下游引物 1μL 基因组DNA（20ng/μL） 1μL DNA聚合酶 0.5μL ddH2O 18μL PCR反应总