ICS11.220 CCSB41 SHAAV T/SHAAV037—2025团 体 标 准 规模化猪场气溶胶中猪流感病毒、猪繁殖 与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的实 时荧光定量PCR检测规范 Specificationforreal-timefluorescencequantitativePCRdetectionofswine influenzavirus,porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusandporcine circovirustype2inaerosolsfromlarge-scalepigfarms 2025-12-30发布 2025-12-30实施 上海市畜牧兽医学会  发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SHAAV037—2025 I目录 前言........................................................................................................................................................................II 1范围...................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件..............................................................................................................................................1 3术语和定义......................................................................................................................................................1 4原理...................................................................................................................................................................1 5试剂与材料......................................................................................................................................................2 6仪器设备..........................................................................................................................................................2 7样品采集、保存及运输..................................................................................................................................2 8实验室检测......................................................................................................................................................3 9生物安全要求..................................................................................................................................................3 附录A.....................................................................................................................................................................5 全国团体标准信息平台 T/SHAAV037—2025 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由上海市畜牧兽医学会提出并归口。 本文件起草单位：中国农业科学院上海兽医研究所、上海市动物疫病预防控制中心、上海农林职业 技术学院。 本文件主要起草人：魏建超、马志永、张海龙、赵洪进、钟登科、杜波、杨德全、沈海潇、赵乾明、 张春晓、林雅芳。 本文件首批承诺执行单位名单：中国农业科学院上海兽医研究所、上海市动物疫病预防控制中心、 上海农林职业技术学院、高邮瑞驰康农牧有限公司、高邮市三益生猪养殖有限公司、徐州万星畜牧有限 公司、高邮市民顺养猪专业合作社、江苏汉世伟食品有限公司、诺达生物科技（赞皇）有限公司、河北 唐碧生物科技有限公司。 全国团体标准信息平台 T/SHAAV037—2025 1规模化猪场气溶胶中猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆 环病毒2型的实时荧光定量PCR检测规范 1范围 本文件规定了规模化猪场气溶胶样品采集的原理、试剂与材料、仪器设备、样品采集、保存及运输、 实验室检测和生物安全要求。 本文件适用于规模化猪场气溶胶样品中猪流感病毒、猪繁殖障碍综合征病毒和猪圆环病毒2型病毒 核酸检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T18090猪繁殖与呼吸综合征诊断方法 GB/T27539动物流感检测A型流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法 GB/T34745猪圆环病毒2型荧光PCR检测方法 NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 规模化猪场large-scalepigfarms 采用现代养殖技术与设施设备，实行批次化、全进全出生产工艺，存栏基础母猪100头以上或年出 栏商品猪500头以上的自繁自养场、专业母猪场、专业育肥猪场。 [GB/T17824.1—2022，定义3.1] 3.2 气溶胶aerosols 悬浮于气体介质中的粒径一般为0.001μm～100μm的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散 体系。 [GB19489—2008，定义2.1] 4原理 液体冲击式微生物气溶胶采样器（又称：液体撞击式采样器）是一种气溶胶微生物采集设备，由采 样瓶、进气弯管、喷嘴、抽气管和控制器组成。空气从进气弯管进入，该管的末端有一微孔喷嘴，气流 经此速度变快，通过高速吸入空气，使其猛烈冲击到气溶胶吸收液的液面，空气中的微生物颗粒因惯性 全国团体标准信息平台 T/SHAAV037—2025 2作用而被捕获在气溶胶吸收液中，随着采样时间的进行，越来越多的微生物被不断收集到固定体积的气 溶胶吸收液中，从而实现气溶胶中微生物的富集。冲击完液面后的空气通过采样器的出口排出。 5试剂与材料 5.1试剂 除非另有说明，在检测中使用的试剂均为分析纯，水应符合GB/T6682要求。所用液体试剂均需使 用无DNAase/RNAase的容器进行分装。 5.1.1气溶胶吸收液为30%甘油磷酸缓冲液（pH7.4）：配制方法见附录A。 5.1.2商品化DNA/RNA核酸提取试剂盒。 5.2材料 5.2.120mL采样瓶。。 5.2.220mL离心管。 6仪器设备 6.1液体冲击式微生物气溶胶采样器。 6.2高压蒸汽灭菌器。 6.3Ⅱ级生物安全柜。 6.4高速冷冻离心机，可控温至4℃，离心速度12000r/min以上。 6.5实时荧光定量PCR仪。 6.6移液器，量程为0.5µL～10µL、2µL～20µL、20µL～200µL和200µL～1000µL。 7样品采集、保存及运输 7.1布点原则 7.1.1一般采集猪舍内的空气样本来评价规模化猪场空气中微生物状况。 7.1.2同类型猪舍采样点设置条件应一致，同一猪舍内采样点位置应固定。 7.1.3猪舍内多点采样时，应按照对角线或梅花式均匀布点，采样点离墙壁距离应大于0.5m，离门窗 及风机出风口距离应大于1m。 7.2采样要求 7.2.1环境温度 5℃≤环境温度≤26℃。 7.2