ICS.67.100.01 CCSX16 团 体 标 准 T/NXZX060—2025 废弃牛奶乳源ACE抑制肽含量的测 定-HPLC-MS/MS法 DeterminationofACEinhibitorypeptidecontentinwastemilksourceby HPLC-MS/MS 2025-12-05发布 2025-12-18实施 宁夏质量技术协会发布 全国团体标准信息平台 I目次 前言....................................................................................................................................................II 1范围............................................................................................................................................-1- 2规范性引用文件........................................................................................................................-1- 3术语和定义................................................................................................................................-1- 4方法原理​................................................................................................................................-1- 5试剂和材料​............................................................................................................................-2- 6仪器设备​................................................................................................................................-2- 7分析步骤​................................................................................................................................-2- 8结果计算....................................................................................................................................-3- 9精密度​....................................................................................................................................-4- 10检出限和定量限​..................................................................................................................-4- 附录A............................................................................................................................................-5- 全国团体标准信息平台 II前言 本标准依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本标准所有内容应符合强制性国家标准、行业标准及地方标准，若与其相抵触时，以国 家标准、行业标准、地方标准为准。 本标准由宁夏计量质量检验检测研究院提出。 本文件由宁夏质量技术协会归口。 本标准起草单位：宁夏计量质量检验检测研究院、蒙牛（银川）乳品有限公司、国智（宁 夏）知识产权服务有限公司。 本标准主要起草人：谭勋哲、银鑫叶、刘杰、张静旖、田菊梅、简敏捷、吕晓东、方向 阳、米江、赵燕、姚博伟、魏建设、段斌、刘杨琼、魏金娥、周慧、石亚东、王俊。 全国团体标准信息平台 -1-废弃牛奶乳源ACE抑制肽含量的测定-HPLC-MS/MS法 1范围 本标准规定了使用高效液相色谱-串联质谱联用（HPLC-MS/MS）技术对废弃牛奶乳源 中特定血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽进行定性鉴定、确认和定量分析的方法。 本标准适用于对废弃牛奶及其制品（包括因品质、保质期、加工剩余等原因未用于直接 食用的液态、固态或半固态废弃乳制品）中已知氨基酸序列的单一或多种ACE抑制肽进行定 性确认和定量分析。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法​ NY/T4746-2025饲料中杆菌肽的测定高效液相色谱-串联质谱法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 废弃牛奶wastemilk 因不符合商品标准、超过保质期、加工剩余或其他原因未被直接用于食品消费的牛奶及 其液态或固态制品。 3.2 ACE抑制肽ACEinhibitorypeptide​ 能够抑制血管紧张素转化酶（ACE）活性，从而具有潜在降血压功能的多肽片段。​ 3.3 特征离子对characteristicionpair 目标分析物在质谱中经碰撞诱导解离产生的，用于定性识别的母离子和子离子组合。通 常选择响应强度高、干扰少的离子对。 3.4 保留时间retentiontime 目标分析物从色谱柱进样到出现色谱峰最大值所需的时间。 3.5 多反应监测multiplereactionmonitoring(MRM) 一种串联质谱扫描模式，通过选择特定的母离子，并监测其碰撞后产生的特定子离子， 实现对目标化合物的高选择性、高灵敏度检测。 4方法原理​ 试样经提取、净化后，采用高效液相色谱（HPLC）分离，目标ACE抑制肽在色谱柱 全国团体标准信息平台 -2-上实现与其他组分的分离。进入质谱（MS）检测器后，在电喷雾离子源（ESI）正离子模式 下进行电离，采用多反应检测（MRM）模式对目标肽的特征离子对进行检测。以目标肽标 准品的保留时间和特征离子对进行定性分析，以色谱峰面积外标法定量。 5试剂和材料​ 除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682规定的一级水要求。 5.1标准品​ 目标ACE抑制肽标准品：纯度≥98%（或已知的确切纯度）。应明确其氨基酸序列和 分子量。​ 5.2试剂​ 5.2.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。 5.2.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。 5.2.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。 5.2.4甲酸铵（HCOONH4）：色谱纯。 5.2.5三氟乙酸（TFA）：色谱纯。 5.2.6乙酸（CH3COOH）：色谱纯。 5.2.7超纯水。​ 5.3溶液配置​ 5.3.1甲酸水溶液（0.1%，v/v）：准确量取1.0mL甲酸（5.2.3），用水稀释并定容至1000 mL，混匀。 5.3.2甲酸乙腈溶液（0.1%，v/v）：准确量取1.0mL甲酸（5.2.3），用乙腈（5.2.1）稀释 并定容至1000mL，混匀。 5.3.3甲酸铵水溶液（10mmol/L）：准确称取0.630g的甲酸铵（5.2.4），用超纯水溶解并 定容，混匀。 5.3.4乙腈-水溶液（50%，v/v）：准确量取500mL乙腈（5.2.1）与500mL超纯水混合。 5.3.5标准储备溶液（1.0mg/mL）：准确称取适量目标ACE抑制肽标准品（5.1），用0.1% 甲酸水溶液或水-乙腈混合溶液溶解并定容，于-20℃以下避光保存，有效期3个月。 5.3.6标准工作溶液：根据需要，用初始流动相或样品基质空白溶液将标准储备溶液（5.3.5） 逐级稀释成一系列不同浓度的标准工作溶液，现用现配。​ 6仪器设备​ 6.1高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪（HPLC-MS/MS），配有电喷雾离子源（ESI）。 6.2分析天平：感量0.01mg和0.1mg。 6.3超声波清洗器。 6.4涡旋混合器。 6.5离心机：转速不低于10000r/min。 6.6微量移液器。 6.7pH计。 6.80.22μm微孔滤膜。 6.9超滤离心装置。 7分析步骤​ 7.1试样制备​ 7.1.1样品预处理 全国团体标准信息平台 -3-废弃牛奶样品可能含有沉淀