ICS.67.100.01 CCSX16 团 体 标 准 T/NXZX059—2025 牛奶和牛奶制品微生物检验的球菌 检测方法 Microbiologicalexaminationofmilkandmilkproducts–Methodsfor detectionofcocci 2025-12-05发布 2025-12-18实施 宁夏质量技术协会发布 全国团体标准信息平台 I目次 前言................................................................................................................................................II 1范围............................................................................................................................................-1- 2规范性引用文件........................................................................................................................-1- 3术语和定义................................................................................................................................-1- 4球菌检测​................................................................................................................................-1- 5质量控制....................................................................................................................................-3- 6注意事项....................................................................................................................................-3- 7结果解释与应用........................................................................................................................-3- 附录A............................................................................................................................................-4- 全国团体标准信息平台 II前言 本标准依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本标准内容应符合强制性国家标准、行业标准及地方标准；如有抵触，应以强制性标准 为准。 本标准由宁夏计量质量检验检测研究院提出。 本标准由宁夏质量技术协会归口。 本标准起草单位：宁夏计量质量检验检测研究院、蒙牛（银川）乳品有限公司、国智（宁 夏）知识产权服务有限公司。 本标准主要起草人：谭勋哲、银鑫叶、刘杰、张静旖、田菊梅、简敏捷、吕晓东、方向 阳、米江、赵燕、姚博伟、魏建设、段斌、刘杨琼、魏金娥、周慧、石亚东、王俊。 全国团体标准信息平台 -1-牛奶和牛奶制品微生物检验的球菌检测方法 1范围 本标准规定了牛奶和牛奶制品中常见球菌（如葡萄球菌属、链球菌属等）的检测方法。 本标准适用于生乳及乳制品（包括但不限于巴氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳、发酵乳、奶 粉、奶酪等）中目标球菌的分离与鉴定。 注：本方法为标准化的实验室检测程序。用户应根据产品适用的食品安全国家标准（GB29921）的具 体要求，确定是否需要开展特定致病球菌（如金黄色葡萄球菌）的检测，并正确应用检测结果进行符合性 判定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.1-2016食品安全国家标准食品微生物学检验总则​ GB4789.11-2014食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验 GB4789.18-2024食品安全国家标准食品微生物学检验乳与乳制品采样和检样处理​ GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法​ GB29921-2021食品安全国家标准预包装食品中致病菌限量​ 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 球菌coccus​ 一类呈球形或近似球形的细菌，根据其排列方式可分为单球菌、双球菌、链球菌、葡萄 球菌等，部分球菌可导致乳制品腐败变质或引发食源性疾病。​ 4球菌检测​ 4.1检验原理​ 本标准采用集成化检测设计，基于选择性培养基对牛奶及乳制品中常见的葡萄球菌属和 链球菌属进行同步分离与鉴定。该方法通过共享样品前处理流程、并行分离培养，以及系统 化的形态学、染色及生化鉴定步骤，在保证检测准确性的前提下，旨在提升检测效率，缩短 整体检测周期。与分别检测相比，本方法可减少重复操作，节约实验室资源。 球菌检测基于选择性培养基分离、形态学观察、染色特性及生化反应的综合鉴定。 葡萄球菌：在Baird-Parker琼脂上形成黑色或灰色菌落，周围有浑浊带和透明圈，触酶 试验阳性，血浆凝固酶阳性者可鉴定为金黄色葡萄球菌。 链球菌：在血琼脂平板上形成灰白色小菌落，依据溶血类型（α、β、γ）初步分类，结 合CAMP试验、七叶苷水解、马尿酸钠水解等生化反应进一步鉴定为无乳链球菌、停乳链球 菌、乳房链球菌等。 4.2试剂与材料​ 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。具体试剂 全国团体标准信息平台 -2-配制方法见附录A。 4.2.1培养基：Baird-Parker琼脂、血琼脂平板、胰蛋白胨大豆肉汤。 4.2.2染色液：革兰氏染色液。 4.2.3生化试剂：3%过氧化氢溶液、兔血浆、糖发酵管（甘露醇、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、 蔗糖等糖发酵管）、七叶苷培养基、马尿酸钠培养基。 4.2.4稀释液：0.85%无菌氯化钠溶液。 4.2.5无菌采样工具：无菌采样勺、采样管、无菌乳样杯、无菌吸管、无菌镊子等，使用前 应经高压蒸汽灭菌（121℃，15min~20min）处理。 4.3仪器设备​ 4.3.1恒温培养箱：温度范围25℃~65℃，精度±0.5℃。 4.3.2生物安全柜：垂直层流型，气流流速0.3m/s~0.5m/s，定期进行气流和洁净度验证。 4.3.3显微镜：配备10×、40×、100×等物镜，可清晰观察细菌形态，配备油镜用于革兰氏 染色观察。​ 4.3.4高压蒸汽灭菌器：能够达到121℃，压力103.4kPa。 4.3.5电子天平：感量为0.1g或0.01g。 4.3.6均质器：转速8000r/min~10000r/min，可定时。 4.4检验步骤 4.4.1通则 为最大化提升检测效率，推荐实验室在计划同时检测葡萄球菌和链球菌时，采用整合流 程。即从同一份样品制备出共用的1:10样品匀液（见4.4.2），并据此进行后续系列稀释。此 后的分离培养（4.4.3）可在同一批次内，使用同一稀释度的样品匀液连续或同步完成两种培 养基的接种，从而实现单次样品处理，完成多目标筛查。 4.4.2采样与样品处理 样品采样按GB4789.18的规定执行。实验室样品处理按以下步骤进行： a）液态样品（生乳、巴氏杀菌乳等）：无菌操作吸取25mL（g）样品，加入225mL无 菌氯化钠稀释液中，充分振摇，制成1:10的样品匀液。 b）固态或半固态样品（乳粉、干酪等）：无菌操作称取25g样品，加入225mL无菌氯 化钠稀释液，用均质器均质1min~2min，制成1:10的样品匀液。 c）根据样品污染预期，用无菌氯化钠稀释液对1:10样品匀液进行10倍系列稀释，以备 接种。 4.4.3分离培养​ 4.4.3.1葡萄球菌分离：将适当稀释度的样品匀液分别吸取0.1mL，涂布于Baird-Parker琼 脂平板上，用无菌涂布棒均匀涂布，每个稀释度设两个平行平板。将平板置于36℃±1℃的 恒温培养箱中培养24h~48h，观察菌落形态。典型的葡萄球菌菌落在Baird-Parker琼脂平 板上为圆形、凸起、直径1mm~2mm，颜色为黑色或灰色，周围有浑浊带和透明圈。 4.4.3.2链球菌分离：将适当稀释度的样品匀液吸取0.1mL，接种于血琼脂平板上，用无菌 涂布棒均匀涂布，每个稀释度涂布2个平板。将平板置于36℃±1℃的恒温培养箱中培养24h ~48h，观察菌落形态和溶血现象。链球菌在血琼脂平板上形成灰白色、半透明、表面光滑 的小菌落，根