ICS 67.050 CCS A 017 团 体 标 准 T/ NAIA 0442—2025 枸杞干果中 5种有机酸的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of Five organic acids in Dried Wolfberry by HPLC-MS/MS 2025-12- 25发布 2025-12- 31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0442-2025 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全） ）、宁夏计量质量检验检测研究院、宁夏师范大学、宁夏医科大学、宁夏化学 分析测试协会。 本文件主要起草人 ：朱燕燕、马桂娟、郭阳、姚博伟、张瑶、曹江平、于永杰、王琛、高永梅、 姚晓瑜、汤丽华、吕毅、岳苑、张小飞。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0442-2025 1枸杞干果中 5种有机酸的测定 液相色谱 -串联质谱法 1范围 本文件规定了 枸杞干果中 5种有机酸（水杨酸，丁香酸，阿魏酸，绿原酸和咖啡酸 ）测定的液 相色谱 -串联质谱检测方法。 本文件适用枸杞中枸杞干果中水杨酸，丁香酸，阿魏酸， 绿原酸和咖啡酸 5种有机酸的测定 。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样经有机水溶液涡旋震荡提取 ，取上清液 ，经分散固相萃取净化 ，反相色谱柱分离 ，高效液 相色谱-质谱仪测定，外标法定量。 5试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1试剂 5.1.1甲酸：色谱纯。 5.1.2乙腈：色谱纯。 5.1.3甲醇：色谱纯。 5.1.4 十八烷基键合硅胶吸附剂（ C18）：粒径 50 μm。 5.1.5石墨化炭黑（ GCB）：粒径 50 μm。 5.1.6 0.1%甲酸水溶液：取甲酸（ 5.1.1）1.0 mL，用水定容到 1000 mL，混匀。 5.1.7 50%甲醇水溶液：取甲醇（ 5.1.3）50 mL，用水定容至 100 mL，混匀。 5.2标准品 5种有机酸标准品名称、化学分子式、 CAS号和纯度见附录 A。 5.3标准溶液配制 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0442-2025 25.3.1 标准储备液 （1.0 g/L）：分别准确称取水杨酸 ，丁香酸，阿魏酸，绿原酸和咖啡酸标准品 10 mg （准确至 0.1 mg），于 10 mL容量瓶中，分别用甲醇（ 5.1.3）溶解并定容至刻度，冷藏保存。 5.3.2 混合标准中间液（ 100 mg/L）：分别准确吸取水杨酸，丁香酸，阿魏酸，绿原酸和咖啡酸标 准储备液（ 5.3.1）各 1.0 mL于10 mL容量瓶中，用 50 %甲醇水（ 5.1.7）定容。 5.3.3 混合标准使用液：分别准确吸取混合标准储备液（ 5.3.2）适量，用 50 %甲醇水配制成浓度为 5.0 μg/L~800.0 μg/L的标准工作液，临用现配。 6仪器和设备 6.1液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源。 6.2天平：感量 0.01 mg和0.01 g。 6.3涡旋混合器。 6.4高速离心机： 最大转速 9000 r/min。 7分析步骤 7.1试样的制备 枸杞干果样本取可食用部分，混合均匀，搅拌破碎，装入密闭洁净容器，冷冻保存。 7.2试样的处理 称取 1 g（精确至 0.01 g）枸杞样品置于 50 mL具塞离心管中， 加入 10 mL 50 %甲醇水 （5.1.7），涡旋提取 10 min，6000 r/min离心 5 min；取2 mL提取液加入含有 100 mg C18粉末 （5.1.4）和50 mg GCB（5.1.5）的离心管中 ，涡旋 5 min，8000 r/min离心 5 min，取上清液经 0.22 μm 滤膜过滤后，上机待测。 7.3仪器参考条件 7.3.1液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18，2.1 mm×150 mm，粒径 3.5 μm或性能相当。 b）柱温： 40 ℃。 c）流动相： A：0.1 %的甲酸水溶液 （5.1.6），B：乙腈（5.1.2）,梯度洗脱条件见表 1。 d）流速： 0.3 mL/min。 e）进样量： 5 μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL/min） 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 0.3 92 8 6.50 0.3 50 50 8.00 0.3 92 8 10.00 0.3 92 8 7.3.2质谱参考条件 a）电离方式：电喷雾离子源（ ESI）。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0442-2025 3b）扫描方式：负离子扫描。 c）检测方式：多反应监测（ MRM）。 d）鞘气温度： 325 ℃。 e）鞘气流速： 10.0 L/min。 f）雾化器压力： 310.23 kPa。 g）喷嘴电压： 500 V。 h）毛细管电压： 3500 V。 i）定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞能量等参数参见 附录 B。 7.4定性确证 7.4.1保留时间 被测物质色谱峰保留时间与标准物质色谱峰保留时间相比较，相对误差应在 ±2.5 %以内。 7.4.2离子丰度比 相同实验条件下进行样品测定时 ，如果检出色谱峰的保留时间与标准样品相一致 ，并且在扣除 背景后的样品质谱图中 ，所选择的离子均出现 。而且样品化合物的离子丰度比与质量浓度相当的标 准溶液相比，相似度的允许偏差不超过 表2规定的范围，则可判定样品中存在目标组分。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50% ＞20%至50% ＞10%至20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.5定量测定 将标准溶液与试液依次注入液相色谱 -串联质谱仪中 ，采用标准溶液校准曲线外标法定量 ，待测 试液中目标物的响应值均应在仪器检测的定量线性范围内 ，超过线性范围时应进行适当倍数稀释后 再进行分析。在上述液相色谱质谱条件下， 5种有机酸标准溶液的特征离子质量色谱图见附录 B。 7.6空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 8结果与表达 试样中 5种有机酸含量按式（ 1）进行计算： 式中： X ──试样中化合物含量，单位为微克每千克（ μg/kg）； ρ ──由标准曲线计算出的试样溶液浓度，单位为 微克每升（ μg/L）； V ──提取液体积，单位为毫升（ mL）； m ──试样质量，单位为克（ g）。 注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 )1(10001000 mVX 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0442-2025 49精密度 在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10 %。 10定量限 水杨酸的检出限为 0.5 μg/kg，丁香酸的检出限为 0.5 μg/kg，阿魏酸的检出限为 0.5 μg/kg，绿 原酸的检出限为 0.5 μg/kg，咖啡酸的 检出限为 0.5 μg/kg；水杨酸定量限 为2.0 μg/kg，丁香酸定量限 为2.0 μg/kg，阿魏酸定量限 为2.0 μg/kg，绿原酸的定量限为 2.0 μg/kg，咖啡酸 的定量限为 2.0 μg/kg。 全国团体标准信息平台