ICS 67.080 CCS A 017 团 体 标 准 T/ NAIA 0440—2025 枸杞干果中苦参碱和氧化苦参碱残留量 的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of Matrine and Oxymatrine in Dried Wolfberry by HPLC-MS/MS 2025-12- 25发布 2025-12- 31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0440-2025 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全） ）、宁夏计量质量检验检测研究院、宁夏师范大学、宁夏医科大学、北方民族 大学、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：朱燕燕、马桂娟、王泽岚、姚博伟、张瑶、刘竞择、曹江平、于永杰、卜 春苗、何卉、周锦文、汤丽华、吕毅、岳苑、张小飞。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0440-2025 1枸杞干果中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1范围 本文件规定了枸杞干果中苦参碱和氧化苦参碱的液相色谱 -串联质谱检测方法。 本文件适用枸杞干果中苦参碱和氧化苦参碱的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样用水复溶后经乙腈提取，分散固相萃取净化，液相色谱 -串联质谱仪测定，外标法定量。 5试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1乙腈：色谱纯。 5.1.2甲醇：质谱级。 5.1.3甲酸：优级纯。 5.1.4无水硫酸镁：色谱纯。 5.1.5氯化钠。 5.1.6 N-丙基乙二胺（ PSA）粉末： 粒径 50 μm。 5.1.7十八烷基（ C18）粉末： 粒径 50 μm。 5.1.8 0.1%甲酸水溶液：取甲酸（ 5.1.3）1.0 mL，用水定容到 1000 mL，摇匀。 5.1.9 50%甲醇水溶液：取甲醇（ 5.1.2）100 mL与水100 mL，摇匀。 5.1.10 净化填料： 取300 mg PSA（5.1.6）、 100 mg C18（5.1.7）、 160 mg无水硫酸镁（ 5.1.4）， 混匀。 5.2标准品 苦参碱和氧化苦参碱中文名称、英文缩写、 CAS号和化学分子式 见附录表 A。 5.3标准溶液配制 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0440-2025 25.3.1标准储备液（ 1000 mg/L）：准确称取苦参碱和氧化苦参碱 标准品 10.0 mg，分别用甲醇溶解 并定容至 10.0 mL，冷冻避光贮存， 有效期 6个月。 5.3.2混合标准中间液 （10.0 μg/mL）：分别准确吸取苦参碱和氧化苦参碱储备液 各0.1 mL于10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，冷冻避光贮存。 5.3.3混合标准工作液：分别准确吸取不同体积混合标准中间液， 用50%甲醇水配制成浓度 为 1.0μg/L~500.0 μg/L的系列标准工作溶液，临用现配。 6仪器和设备 6.1液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源。 6.2天平：感量 0.0001 g和0.01 g。 6.3高速粉碎机。 6.4涡旋混合器。 6.5离心机： 最大转速 10000 r/min。 6.6滤膜： 0.22 μm，有机相。 7分析步骤 7.1试样的制备 枸杞样品于 2~8℃冷藏保存 。试验时将枸杞样品取出 ，经高速粉碎机粉碎 ，分别置于样品袋中 ， 冷藏，备用。 7.2试液的提取 称取 2 g样品粉末 于50 mL离心管中， 加入 5 mL水，静置 120 min，加入 10 mL乙腈 （5.1.1）、 1.5 g氯化钠（5.1.5）、 4 g无水硫酸镁（ 5.1.4），涡旋 5 min，8000 r/min离心 3 min。 吸取 5.0 mL上清液至装有 300 mg PSA（5.1.6）、100 mg C18（5.1.7）、160 mg无水硫酸镁 （5.1.4） 的净化管内， 涡旋 3 min，8000 r/min离心 3 min，经0.22 μm有机滤膜过滤，上机测定。 7.3仪器参考条件 7.3.1液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18，2.1 mm×100 mm，粒径 1.7 μm或性能相当。 b）柱温： 35℃。 c）流动相： A相为 0.1%甲酸水溶液（ 5.1.8）， B相为甲醇（ 5.1.2），流动相梯度条件 见表 1。 d）流速： 0.25 mL/min。 e）进样量： 10 μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL/min） 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 0.25 99 1 2.00 0.25 99 1 6.00 0.25 10 90 6.50 0.25 10 90 6.51 0.25 99 1 8.00 0.25 99 1 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0440-2025 37.3.2质谱参考条件 a）离子源：电喷雾离子源（ ESI）。 b）扫描方式：正离子扫描。 c）检测方式：多反应监测（ MRM）。 d）鞘气温度 ：350℃。 e）鞘气流速： 11.0 L/min。 f）脱溶剂气 温度：300℃。 g）脱溶剂气 流速：7.0 L/min。 h）毛细管电压： 3500 V（正模式）。 i）定性离子对、定量离子对、 碰撞能量等参数参见附录 B。 7.4定性测定 经确证分析被测物质色谱峰保留时间与标准物质相一致（± 0.2 min），并且在扣除背景后的样 品谱图中 ，所选择的离子均出现 。同时所选择离子的丰度比与标准溶液中相关离子的相对丰度一致 ， 相似度在允许偏差之内（ 见表 2），则可判定样品中存在对应的被测物。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50% ＞20%至50% ＞10%至20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.5定量测定 根据试液中被测物含量情况 ，选定浓度相近的基质标准混合使用液 ，基质标准混合使用液和待 测试液中被测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内 。基质标准混合使用液与试液等体积进样测 定。标准溶液及试 液均按 7.3.1和7.3.2规定的条件进行测定 ，如果试液中与标准溶液相同的保留时 间有峰出现，则对其进行确证。苦参碱和氧化苦参碱标准品的多反应监测（ MRM）色谱图参见附 录C，采用溶剂校准曲线外标法定量。 7.6空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 8结果计算 试样中苦参碱和氧化苦参碱的含量按式（ 1）进行计算： 式中： X ──试样中各种化合物含量，单位为毫克每千克（ mg/kg）； p ──由标准曲线计算出的试样溶液浓度，单位为 微克每升（ μg/L）； V ──试样的最后定容体积，单位为毫升（ mL）； m ──试样质量，单位为克（ g）。 注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 )1(1000 10001000 mVX 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0440-2025 49精密度 在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。 10其他 苦参碱和氧化苦参碱 的检出限均 为1.5 μg/kg，定量限均 为5 μg/kg。 全国团体标准信息平台