SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4405—2015 黄瓜花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Cucumber mosaic virus 行业标准信息服务平台 2015-12-04发布 2016-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4405—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民 共和国重庆出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：郑耘、卢小雨、张伟锋、向才玉、王红英、龙海、潘广、胡运发、李彬、孔德英。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4405—2015 黄瓜花叶病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了黄瓜花叶病毒的生物学测定、血清学检测、免疫电镜、RT-PCR检疫鉴定方法。 本标准适用于进出境植物种子苗木等繁殖材料和植物产品中黄瓜花叶病毒的检疫鉴定 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3基本信息 学名：Cucumbermosaicvirus 缩写：CMV 分类地位：雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）；黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus）。 其他信息参见附录A。 4 原理和方法 依据CMV鉴别寄主的症状、病毒形态、免疫学特性及分子生物学特性进行检测判定。 业标准# 5 仪器设备、用具及设施 5.1 仪器设备 息服务平台 天平（感量，1/10000g）、pH计、酶标仪、透射电子显微镜、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、 恒温水浴锅、高速离心机、超低温冰箱等。 5.2用具 微量移液器、研钵、离心管、花盆、消毒土等。 5.3设施 植物隔离检疫温室。 6试剂 DAS-ELISA检测试剂（见附录B）、RT-PCR检测试剂（见附录C）、生物学测定试剂（见8.4）。免疫 1 SN/T 4405—2015 电镜检测试剂按照SN/T1840的规定执行。 7样品制备 7.1种子类 抽样按照SN/T2122的规定执行。 将种子（重点挑取畸形、不成熟的种子）播于灭菌土中，于25℃左右生长并进行症状观察。待长出 3片～4片真叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组（10株为1组）并编号。 7.2苗木类 抽样SN/T2122规定抽样。 将苗木种植于隔离温室中，于25℃左右生长并进行症状观察。有症状的苗木单独检测。没有症状 的分组检测，分组方法同7.1。 8检测方法 8.1 DAS-ELISA检测 方法见附录B。 8.2 免疫电镜检测 按照SN/T1840的规定执行。 8.3 3RT-PCR检测 方法见附录C。 8.4 生物学测定 8.4.1接种 病叶加1：1(质量：体积)的磷酸盐缓冲液(0.1mol/L，pH7.2)于研钵中充分研碎，在待接种植物 叶片表面均匀酒上硅藻土，用手指蘸取研磨好的汁液轻轻涂抹于叶片表面。 8.4.2鉴别寄主症状 苋色藜（Chenopodiumamaranticolor）：褪绿或坏死斑，无系统症状。 黄瓜（Cucumissativus）：绿色或黄绿色系统花叶。 昆诺藜（Chenopodiumquinoa）：褪绿或坏死斑，无系统症状。 番茄（Lycopersiconesculentum）：系统花叶，叶片变窄。 克利夫兰烟（Nicotianaclevelandii）：接种叶无症状，或形成褪绿斑或坏死斑；也可能形成绿色或黄 绿色系统花叶或环斑。 心叶烟（Nicotianaglutinosa）：接种叶无症状，或形成褪绿斑或坏死斑；也可能形成绿色或黄绿色 系统花叶或环斑。 烟草（Nicotiana tabacum）：接种叶无症状，或形成褪绿斑或坏死斑；也可能形成系统花叶或畸形。 菜豆（Phaseolusulgaris）：冬季表现细小的坏死斑，但夏季无症状表现；无系统症状。 2