ICS 65.020.01 CCS GBC X 55 广西物品编码与标准化促进会 团体标准 T/GBC 23—2025 代替 T/GBC 23 —2024 六堡茶中粗多糖含量的测定 分光光度法 Determination of crude polysaccharide content in Liubao tea by spectrophotometry 2025年 版 2024 - 07 - 11发布 2024 - 07 - 11实施 广西物品编码与标准化促进会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GBC 23 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广西壮族自治区分析测试研究中心提出并宣贯。 本文件由广西物品编码与标准化促进会归口。 本文件起草单位：广西壮族自治区分析测试研究中心、广西南亚热带农业科学研究所、广西壮族自 治区产品质量检验研究院、广西思浦林科技有限公司、广西西大检测有限公司、广西壮族自治区生态环 境监测中心、广西壮族自治区标准技术研究院、广西南宁信雄科技服务有限公司。 本文件主要起草人：韦英亮、吴玲玲、邓卫利、黄静、黄殿贵、宁盼盼、何善廉、黄超技、刘维明、 刘双斌、石梁稳、韦天富、黄宏飞、蒋剑波、刘洋、邓艺萍、潘扬昌、苏紫敏、黄一帆、何禹钦、潘尚 丽、班雁华、谢敏蓉、梁鑫佳、班书浩、梁贤智、王明释、张思敏、陈桂鸾、陈德翼、韦猛、林葵、何 明远、陆云、黄韵霖、吴琼婧、盘杨桂、韦丽丽、黄文杰、韦怿琳、杨剑、莫淇斐、覃石凤 。 本标准版权 为广西物品编码与标准化促进会所有，除了用于国家法律或事先得到广西物品编码 与标准化促进会的许可外 ,不得以任何形式或任何手段复制、再版或使用本标准及其章节 ,包括电子 版、影印件 ,或发布在互联网及内部网络等。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GBC 23 —2025 1 六堡茶中粗多糖含量的测定 分光光度法 1 范围 本文件界定了六堡茶中粗多糖含量 的术语和定义， 规定了六堡茶中粗多糖含量的分光光度法测定 方法。 本文件适用于六堡茶中粗多糖含量的测定。 本文件方法的检出限为 0.5 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 DB45/T 581 六堡茶 3 术语和定义 DB45/T 581 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 粗多糖 crude polysaccharide 以β-D-葡聚糖或 α-D-葡聚糖或其他碳糖为主链的一系列高分子化合物。 4 方法原理 粗多糖在浓硫酸的作用下，水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在 485 nm处有特征吸收，与标准系列比较定量。 5 试剂和材料 通用要求 除非另有说明 ,本方法所用试剂分析纯以上试剂 ,水为 GB/T 6682 规定的三级水。 试剂 5.2.1 硫酸（H2SO4），ρ=1.84 g/mL。 5.2.2 无水乙醇（ C2H5OH）。 5.2.3 苯酚（C6H6O），重蒸馏。 试剂配制 5.3.1 80％乙醇溶液：取 80 mL乙醇,用水稀释定容至 100 mL,混匀。 5.3.2 80％苯酚溶液：称取 80 g苯酚（5.2.3）于100 mL烧杯中，加水溶解，转移至 100 mL棕色容量 瓶中并定容，摇匀后，置 4 ℃冰箱中储存备用。 5.3.3 5％苯酚溶液：吸取 5 mL80％苯酚溶液（ 5.3.2），溶于 75 mL水中，混匀，现用现配。 标准品 D-无水葡萄糖 (C6H12O6,CAS号:50-99-7):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品， 使用前应于 105 ℃恒温烘干至恒重。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GBC 23 —2025 2 标准溶液配置 0.1 mg/mL标准葡萄糖溶液：取 100 mgD-无水葡萄糖（ 5.4），精密称定，置于 500 mL烧杯中，加水溶 解，转移至 1 000 mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀后，置 4 ℃冰箱中储存备用。 6 仪器和设备 紫外可见分光光度计。 分析天平，感量为 0.1 mg。 超声波提取器。 涡旋混合器。 离心机， 4 000 r/min。 7 样品制备与保存 取200 g样品，粉碎后过 60目筛处理后，混合均匀，常温保存。 8 测定步骤 样品处理 称取粉碎后样品约 1.0 g（准确至 0.0001 g）。置于 100 mL具塞锥形瓶中，加入无水乙醇 30 mL，置超 声提取器中提取 40 min，之后于离心机以 4 000 r/min离心10 min，弃去上清液，残渣加 50 mL水，超声提 取3次，每次30 min，冷却后用滤纸过滤，合并 3次滤液， 混匀后移取 1 mL到25 mL容量瓶中，加水至刻度， 摇匀，即得样品测定液。 绘制标准曲线 移取0.1 mg/mL的葡萄糖溶液（ 5.5）0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL分别置 于具塞试管中，各加水补至 1.0 mL后，分别加入 1.0 mL5％苯酚溶液（ 5.3.3）和3.0 mL硫酸（5.2.1）， 振荡混合后，置水浴锅中沸水加热 10 min，冷却至室温后，用试剂空白作为参比溶液，用紫外可见分光 光度计在 485 nm处测定吸光度。 以葡萄糖溶液的浓度为横坐标， 吸光度为纵坐标， 绘制葡萄糖标准曲线。 比色测定 精密吸取样品测定液 1.0 mL于20 mL具塞试管中，按步骤 8.2操作，测定吸光度，重复 3次，取吸光度 平均值。 空白实验 除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。 9 结果计算 样品中粗多糖含量以质量分数 ω计，单位以克每百克（ g/100g）表示，按式（ 1）计算： ω=ρ×V1×V2×100 m×V3×1000×0.9 ································ ································ · (1) 式中： ρ——比色测定的吸光值扣除空白试验值后，从标准曲线上查得样品测定液的浓度，单位为毫克每 毫升（mg/mL）； V1——样品测定液的体积，单位为毫升（ mL）； V2——样品提取液的体积，单位为毫升（ mL）； V3——配置样品测定液所用的样品提取液的体积，单位为毫升（ mL）； m——样品质量，单位为克（ mg）； 0.9——葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GBC 23 —2025 3 注： 计算结果保留至小数点后两位。 10 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10％。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台