ICS11.020 CCSC61 CNHAW 中国民族卫生协会团体标准 T/CNHAW0022—2026 利什曼原虫标准株技术标准 TechnicalstandardsforLeishmaniareferencestrains 2026-1-7发布 2026-1-30实施 中国民族卫生协会  发布 全国团体标准信息平台 T/CNHAW0022—2026 I目次 前言..................................................................................II 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3术语和定义..........................................................................1 3.1利什曼原虫......................................................................1 3.2利什曼原虫无鞭毛体..............................................................1 3.3利什曼原虫前鞭毛体..............................................................1 3.4利什曼原虫标准株................................................................1 4标准株技术要求......................................................................2 4.1虫体分离........................................................................2 4.2生物学特征......................................................................2 4.3活性要求........................................................................2 4.4稳定性要求......................................................................2 5信息要求............................................................................3 6保存要求............................................................................3 7质量控制要求........................................................................3 8生物安全要求........................................................................3 9伦理要求............................................................................3 附录A（资料性）流行病学分型和分子标志................................................4 附录B（规范性）种株溯源鉴定方法......................................................5 附录C（规范性）培养基的制备方法......................................................8 参考文献...............................................................................9 全国团体标准信息平台 T/CNHAW0022—2026 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所（国家热带病研究中心）提出，本文件由中国 民族卫生协会归口。 本文件起草单位：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所（国家热带病研究中心）、上海市寄 生虫学会、河南省疾病预防控制中心（河南省预防医学科学院）、复旦大学、上海交通大学、甘肃省疾 病预防控制中心（甘肃省预防医学科学院）、山西省阳泉市疾病预防控制中心、新疆维吾尔自治区疾病 预防控制中心（新疆维吾尔自治区预防医学科学院）。 本文件主要起草人：高春花、李石柱、郑彬、王汝波、俞铖航、危芙蓉、邓艳、程训佳、王兆军、 李凡、李宏岩、张海亭、石锋、李诗慧。 全国团体标准信息平台 T/CNHAW0022—2026 1利什曼原虫标准株技术标准 1范围 本文件规定了利什曼原虫标准株的技术要求、信息要求、保存要求、质量控制要求、生物安全要求 和伦理要求。 本文件适用于开展利什曼原虫相关研究、教学、检测、诊断及产品研发等活动的机构。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 WS233病原微生物实验室生物安全通用准则 WS/T812病原微生物菌（毒）种国家标准株评价技术标准 WS/T10018利什曼原虫检测涂片镜检法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 利什曼原虫Leishmaniaspp. 隶属原生动物门，鞭毛虫纲，动基体目，锥虫亚目，锥虫科，利什曼属的寄生虫。有寄生于人和犬 等哺乳动物体内的无鞭毛体，及寄生于白蛉消化道内的前鞭毛体两个生活史阶段。有多个虫种，寄生于 人体的利什曼原虫可导致人内脏利什曼病（visceralleishmaniasis）或称黑热病（kala-azar）、皮肤利什 曼病（cutaneousleishmaniasis）或黏膜皮肤利什曼病（mucocutaneousleishmaniasis）。 3.2 利什曼原虫无鞭毛体Leishmaniaamastigote 寄生于人体和/或哺乳动物单核-巨噬细胞内的利什曼原虫生活史时期。虫体呈卵圆形，大小为（2.9～ 5.7）μm×（1.8～4.0）μm，鞭毛不伸出体外、无运动能力。 3.3 利什曼原虫前鞭毛体Leishmaniapromastigote 寄生于白蛉消化道内的利什曼原虫生活史时期。虫体呈梭形，大小为（14.3～20）μm×（1.5～1.8） μm，一鞭毛自虫体前端伸出，有运动能力。 3.4 利什曼原虫标准株Leishmaniareferencestrains 具有我国特定利什曼病流行区利什曼原虫典型生物学特征，其遗传学特性得到确认与保证，具备明 确可检测、可溯源、可传代的特性，能反映该流行区虫种的代表性。以下简称标准株。 全国团体标准信息平台 T/CNHAW0022—2026 24标准株技术要求 4.1虫体分离 无菌采集利什曼原虫感染的动物或患者的骨髓、肝、脾、淋巴结等穿刺物或皮肤组织、组织液经培 养后获得的利什曼原虫前鞭毛体，以及从白蛉体内获得的利什曼原虫前鞭毛体。 4.2生物学特征 4.2.1形态学特征 显微镜下利什曼原虫前鞭毛体呈梭形，前端有一根伸出体外的鞭毛，虫体大小为（14.3～20）μm× （1.5～1.8）μm。活的前鞭毛体运动活泼，鞭毛不停地摆动，鞭毛体密度升高时，常可见虫体前端聚 集成团，排列成菊花状。 4.2.2培养特性 应具有适合的培养条件，分离培养可使用加洛克氏液的三恩氏培养基（简称NNN培养基），扩增 培养也可选用加洛克氏液的NNN培养基或M199完全培养基（制备方法参见附录C）。培养温度应保持 在22℃～26℃。培养过程中应提供相应的生长曲线和传代周期等数据。 4.2.3分子特征 虫种和虫株鉴定应对利什曼原虫的ITS-1和K26基因片段分别进行基因扩增测序，测序后目标序列 与该流行类型虫种和虫株序列同源性均应≥99%。虫种和虫株鉴定方法和不同流行类型标准株判定参见 附录A和附录B。应具有完整基因组序列。全基因组数据应上传中国国家基因库（ChinaNationalGeneBank， CNGB）、国家基因组科学数据中心（NationalGenomicsDataCenter，NGDC）等公共数据库并记录登 录号，注释信息完整规范。 4.2.4感染性 采用5周龄雄性BALB/c小鼠或者金黄地鼠（每组5只及以上），致内脏利什曼病的虫株经尾静脉或 腹腔注射，致皮肤利什曼病的虫株经足垫或耳廓注射，每只实验动物感染数量约为2.5×107个～5×107个 前鞭毛体。感染后持续饲养3个月，致内脏利什曼