ICS07.030 CCS A 43 团 体 标 准 T/CI1228—2025 2025‑10‑31发布 2025‑10‑31实施基于电化学生物传感器的水相体系分子氢 检测技术规程 Technical code for the detection of molecular hydrogen in aqueous systems based on electrochemical biosensors 中国国际科技促进会 中 国 标 准 出 版 社发 布 出 版 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 ⅠT/CI1228—2025 目 次 前言…………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ 1范围………………………………………………………………………………………………………… 1 2规范性引用文件 …………………………………………………………………………………………… 1 3术语和定义 ………………………………………………………………………………………………… 1 4检测程序 …………………………………………………………………………………………………… 1 5电极制备 …………………………………………………………………………………………………… 2 5.1电极清洗 ……………………………………………………………………………………………… 2 5.2多壁碳纳米管 ………………………………………………………………………………………… 2 5.3活化液制备 …………………………………………………………………………………………… 2 5.4碳纳米管表面羧基基团的激活 ……………………………………………………………………… 2 6电极偶联与氢化酶活化 …………………………………………………………………………………… 2 6.1氢化酶与羧基化碳纳米管的共价偶联 ……………………………………………………………… 2 6.2氢化酶的电激活 ……………………………………………………………………………………… 2 7测试条件 …………………………………………………………………………………………………… 2 7.1电化学测试所用电解液的配制 ……………………………………………………………………… 2 7.2检测温度 ……………………………………………………………………………………………… 3 7.3电解液的酸碱度 ……………………………………………………………………………………… 3 8测试设备 …………………………………………………………………………………………………… 3 8.1测试密封次抛套管 …………………………………………………………………………………… 3 8.2电化学工作站 ………………………………………………………………………………………… 3 8.3测试三电极体系 ……………………………………………………………………………………… 3 9测试步骤 …………………………………………………………………………………………………… 3 9.1电极制备 ……………………………………………………………………………………………… 3 9.2样品准备 ……………………………………………………………………………………………… 3 9.3标曲制定 ……………………………………………………………………………………………… 3 9.4实验过程 ……………………………………………………………………………………………… 4 9.5数据分析 ……………………………………………………………………………………………… 4 9.6重复性………………………………………………………………………………………………… 4 9.7测试报告 ……………………………………………………………………………………………… 4 附录A（资料性）电解液配方及分析标准曲线 ……………………………………………………………… 5 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CI1228—2025 前 言 本文件按照 GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由南开大学提出 。 本文件由中国国际科技促进会归口 。 本文件起草单位 ：南开大学 、华东理工大学 、上海交通大学 、东北大学 、广东省科学院生态环境与土壤 研究所、山东得和明兴生物科技有限公司 。 本文件主要起草人 ：张立云、张立新、李文进、谭高翼、邱彦国、刘芳华、徐大可、吴更、范永强、张春秋、 陈瑶、张振杰、罗景山、范建华、张旭。 Ⅲ全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 1T/CI1228—2025 基于电化学生物传感器的水相体系分子氢 检测技术规程 1范围 本文件确立了基于电化学生物传感器检测含氢水相体系中分子氢含量的检测程序 ，描述了相关试验 方法，包括电极的制备 、电极的偶联与氢化酶的活化过程 、测试条件及所使用的测试设备的指示 。 本文件适用于对含氢水溶液 、富氢饮料以及临床生物样本等水相体系中分子氢含量的检测 。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于 本文件。 GB/T19633.2最终灭菌医疗器械包装 第 2部分：成型、密封和装配过程的确认的要求 GB/T24491 多壁碳纳米管 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 羧基化多壁碳纳米管 carboxylated multi -walled carbon nanotubes 通过化学方法在多壁碳纳米管的管壁及端口引入羧基 （-COOH ）官能团后的改性材料 。 3.2 电化学工作站 electrochemical potentiostats 电化学研究和教学常用的测量设备 。 注：是电化学测量系统的简称 ，主要有两大类 ，单通道工作站和多通道工作站 ，应用于生物技术 、物质的定性定量分析等 。 4检测程序 检测程序按照图 1执行。 4"3**'"!,!+/ !F" - *?"F4*   *5  "A 图1电化学生物传感器检测含氢水相体系中分子氢含量的检测流程图 全国团体标准信息平台 2T/CI1228—2025 5电极制备 5.1电极清洗 将电极表面清洗干净 ，去除表面杂质 。 5.2多壁碳纳米管 所用羧基化多壁碳纳米管应符合 GB/T24491相关要求 。将羧基化多壁碳纳米管溶解于二甲基甲 酰胺（DMF）中，随后滴加于碳芯片电极表面 ，并在室温 （25℃±2℃）下自然风干 。 5.3活化液制备 将0.8mol/L1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基 ）碳酰二亚胺 （EDC）与0.2mol/L N -羟基丁二酰亚胺 （NHS） ，均保存在 4℃冰箱，使用时按体积比 1∶1现用现混合 ，配制成羧基活化液 ，为保证活化效果 ，活化 液不重复使用 。 5.4碳纳米管表面羧基基团的激活 使用活化液 （5.3）对电极进行孵育 45min，以实现羧基的活化 。 6电极偶联与氢化酶活化 6.1氢化酶与羧基化碳纳米管的共价偶联 用超纯水流缓冲电极表面 5s，再将大肠杆菌来源的氢化酶 （Hyd-1，蛋白纯度 >95%；经电化学活性 确定其催化翻转频率为 2000s-1，作为标准酶活性 ）活化好的羧基化碳纳米管上 ，孵育5min~10min，利 用酶表面丰富氨基与羧基化碳纳米管共价结合 。 6.2氢化酶的电激活 将电极连接至电化学工作站 ，施加-0.6V（相对于标准氢电极 ，SHE）电压，持续300s，以活化氢 化酶。 7测试条件 7.1电化学测试所用电解液的配制 配制要求如下 ： a）0.1mol/L氯化钠（NaCl） ； b）15mmol/L 乙酸钠； c）15mmol/L 2-环己胺基乙磺酸 （CHES） ； d）15mmol/L 2-吗啉乙磺酸 （MES） ； e）15mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸 （HEPES） ； f）15mmol/L 三羟甲基甲胺基丙磺酸 （TAPS） ； g）缓冲体系调节 pH至7.0； 全国团体标准信息平台