ICS 71.100.40 G 70 HG 备案号：45366—2014 中华人民共和国化工行业标准 HG/T4657—2014 纺织染整助剂 过氧化氢酶 酶活力的测定 Textile dyeing and finishing auxiliaries-Catalase -Determination of enzyme activity 2014-05-12发布 2014-10-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 HG/T 4657—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国染料标准化技术委员会印染助剂分技术委员会（SAC/TC134/SC1)归口。 本标准起草单位：浙江传化股份有限公司、杭州传化精细化工有限公司。 本标准主要起草人：傅佳亚、汪小燕、徐军、赵婷。 HG/T4657—2014 纺织染整助剂 过氧化氢酶 酶活力的测定 1范围 本标准规定了纺织染整助剂中过氧化氢酶酶活力的测定方法。 本标准适用于织物除氧工艺中所使用的过氧化氢酶类纺织染整助剂酶活力的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T601一2002化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T603一2002化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法（modISO3696：1987) GB/T8170—2008 3数值修约规则与极限数值的表示和判定 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 酶活力 enzymeactivity 在规定条件下，以每毫升酶原液每分钟分解的过氧化氢的量（μmol)表示，酶活力单位为μmol/ (mL· min)。 4原理 在一定条件下，过氧化氢酶能把过氧化氢分解为水和氧气。当过氧化氢酶与一定量过氧化氢反应， 用碘量法测定未分解的过氧化氢。即以钼酸铵作催化剂，过氧化氢与碘化钾反应生成游离碘，用硫代硫 酸钠滴定碘，通过换算得出未分解过氧化氢的量，进而计算得出已经分解的过氧化氢量。其反应式 如下： H2O2+2KI+H2SO4→I2+K2SO+2H20 I2+2Na2S2O3—→2NaI+Na2S4O6 5试剂和材料 除非另有规定，仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682一2008规定的三级水。 5.1硫酸溶液，1十9（体积比）：量取10mL浓硫酸，缓缓注人90mL水中，冷却，摇匀。 5.2磷酸氢二钠溶液，0.2mol/L：称取71.6g十二水磷酸氢二钠，溶于1000mL水中。 5.3磷酸二氢钠溶液，0.2mol/L：称取31.2g二水磷酸二氢钠，溶于1000mL水中。 5.4pH=7.0磷酸盐缓冲溶液：磷酸氢二钠溶液（5.2)与磷酸二氢钠溶液（5.3)以体积比6十4混合， 临用时配制。 1 HG/T4657—2014 5.5钼酸铵溶液，100g/L：称取四水合钼酸铵10g，溶于100mL水中。 5.6碘化钾溶液，20%（质量分数）。 5.7过氧化氢溶液，0.06mol/L：称取30%的过氧化氢溶液0.68g，用磷酸盐缓冲溶液（5.4）稀释至 100mL。 5.8硫代硫酸钠标准滴定溶液，c（Na2S2O3）=0.1mol/L：按照GB/T601一2002的规定配制和标定。 5.9 淀粉指示液，5g/L：按照GB/T603一2002的规定配制。 仪器和设备 6.1分析天平：感量0.0001g。 6.2碘量瓶：250mL。 6.3量筒：10mL。 6.4移液管：1mL，5mL，25mL。 6.5碱式滴定管：50mL。 6.6 恒温水槽：能保持试验温度在30℃土0.5℃。 6.7秒表：分格0.1s。 测试步骤 > 7.1试样稀释 7.1.1按公式(1)计算试样的稀释倍数，准确移取一定体积的液体酶样，用水稀释定容。 估计酶活力×5 K= (1) c×10×1000X 式中： c——硫代硫酸钠标准滴定溶液的物质的量浓度的数值，单位为摩尔每升（mol/L)； K——样品的稀释倍数； 5-—反应时间的数值，单位为分钟（min）； 10— 被过氧化氢酶催化的过氧化氢溶液所消耗的硫代硫酸钠标准滴定溶液体积的数值，单位为毫 升(mL)。 7. 1. 2 2若无法得知试样的酶活力估计值，则以稀释500倍进行预试，使被过氧化氢酶催化的过氧化氢 溶液用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定时消耗的标准滴定溶液体积在10mL左右。 7.2测定 用移液管准确加人25mL过氧化氢溶液（5.7)于碘量瓶中，放入30℃恒温水槽至恒温。再用移液 管准确加人1.0mL的酶稀释液，同时开始准确计时5min，立即加人5mL硫酸溶液（5.1)终止酶促反 应，摇匀。加入6mL碘化钾溶液（5.6），再加人5滴钼酸铵溶液（5.5），摇匀，立即用0.1mol/L硫代硫 酸钠标准滴定溶液（5.8)滴定，将近终点时再加人2mL淀粉指示液（5.9），然后继续滴定至蓝色完全消 失为终点。同时做一空白试验 8 结果计算 试样的酶活力以X计，数值用μmol/（mL·min）表示，按公式（2)计算： -(V。-Vi)cKX1000 X= (2) 5 2 HG/T4657—2014 式中： V。—空白试验消耗的硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积的数值，单位为毫升（mL)； V1—样品消耗的硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积的数值，单位为毫升（mL）； c——硫代硫酸钠标准滴定溶液的物质的量浓度的数值，单位为摩尔每升（mol/L)； K—样品的稀释倍数； 5-一反应时间的数值，单位为分钟（min）。 取两次平行测定的算术平均值，按GB/T8170一2008的规定修约至整数为测定结果。两次平行 测定结果相对偏差不大于0.5%。 试验报告 试验报告至少应给出以下内容： a) 试样的描述； b) 本标准的编号； c) 与本标准的差异； d) 试验结果； e) 试验日期； f) 试验温度。 3