ICS 71. 080. 99 G 15 HG 备案号：38617—2013 中华人民共和国化工行业标准 HG/T 4366-2012 稳定性同位素13C、15N双标记-氨基脲 Stable isotope 13C, 15 N labelled semicarbazide 2012-12-28发布 2013-06-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 HG/T 4366-2012 本标准按照GB/T1.1一2009《标准化工作导则 第一部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会(SAC/TC105)归口。 本标准负责起草单位：上海化工研究院。 本标准主要起草人：宋明鸣、杜晓宁、李美华、刘卫霞。 本标准为首次发布。 工 HG/T4366—2012 稳定性同位素13C、15N 双标记-氨基脲 范围 本标准规定了稳定性同位素13C、15N双标记-氮基脲(13C、15N-SEM)的要求、试验方法、检验规则、 包装、标识、运输和贮存。 本标准适用于以全13C、15N双标记的联氨（水合）和尿素为原料，通过有机合成法制备的全13C、 15N双标记的稳定性同位素氨基脲产品。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T8170一2008数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T20622—2006稳定性同位素15N无机标记化合物 HG/T3789一2005稳定性同位素氛气 3符号与缩略语 3. 1 同位素原子的表示："A 其中A表示元素符号，m表示该元素的同位素的原子质量数。例如：15N表示氮元素中质量数为 15的同位素氮原子。 3. 2 同位素丰度的单位表示：atom%"A 表示A元素的质量数为m的原子占A元素的原子百分数。例如：atom%15N表示质量数为15 的同位素氮原子在氮元素中所占的原子百分数。atom%mA可用缩略形式at.%mA表示。 4要求 4.1外观 白色粉末。 4.2技术指标 产品的技术指标应符合表1的要求。 表1产品技术指标 指 项 目 优级品 合格品 > 纯度（质量分数)/% 98. 5 97. 5 13C同位素丰度/(at.%13C) 98. 0 95. 0 15N同位素丰度/(at.%15N) 0°66 97. 0 1 HG/T4366—2012 5试验方法 本试验方法所用试剂、溶液除另有规定外，高效液相色谱分析用水应符合GB/T6682中一级水规 格，其余实验室用水应符合GB/T6682中三级水规格。 5.1外观 目视检验。 5.2纯度高效液相色谱法 5.2.1方法原理 采用高效液相色谱法，以天然丰度氨基脲标准品作为外标，建立标准工作曲线，测定稳定性同位 素13C、15N双标记-氨基脲的纯度。 5.2.2试剂和材料 5.2.2.1乙睛：色谱纯； 5.2.2.2乙酸铵：分析纯； 5.2.2.3乙酸：分析纯； 5.2.2.40.005mol/L乙酸铵水溶液：称取0.385g乙酸铵，用水溶解，定容至1000mL。在pH计的 指示下用乙酸调节溶液的pH值至5.5。 5.2.2.50.005mol/L乙酸铵水溶液（pH=5.5)/乙腈=50/50的混合溶液：将0.005mol/L乙酸铵水 溶液（pH=5.5）与乙腈按50/50的体积比混合均匀得到。 5.2.2.6氨基脲标准品：氨基脲纯度≥99%。 5.2.3仪器和设备 5.2.3.1通常实验室用玻璃仪器及设备。 5.2.3.2涡旋混合器。 5.2.3.3高效液相色谱仪，配紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2.3.4微量进样器：25μL。 5.2.3.5分析天平：精度十万分之一。 5.2.3.6微孔滤膜：孔径0.45um。 5.2.3.7超声波脱气仪。 5.2.4色谱条件 色谱柱：HILIC(150mmX4.6mm，5μm）液相色谱柱或相当者； 柱温：30℃； 进样量：5μL； 检测波长：210nm； 流速：1.0mL/min； 流动相：A：0.005mol/L乙酸铵水溶液（pH=5.5）;B：乙腈； 洗脱条件：A/B=50/50，等度洗脱； 推荐的色谱条件或其他达到同等分离效果的条件均可。 5.2.5分析步骤 5.2.5.1外标标准储备溶液的制备 称量1.0mg～1.5mg氨基脲标准品，精确到0.01mg。将标准品置于10mL容量瓶中，用 标准储备溶液，避光保存于冰箱中，可使用三个月。 5.2.5.2外标标准工作溶液的制备 2 HG/T4366—2012 塞离心管中，用0.005mol/L乙酸铵水溶液（pH=5.5）/乙腈=50/50的混合溶液（5.2.2.5）分别稀释 至1mL，作为标准工作溶液，避光保存于冰箱中，可使用一个月。 5.2.5.3待测产品的溶解 称量1.0mg~1.5mg待测产品，精确到0.01mg。将样品置于10mL容量瓶中，用0.005mol/L 乙酸铵水溶液（pH=5.5)/乙腈=50/50的混合溶液（5.2.2.5）溶解，定容至10mL。 5.2.5.4标准工作曲线的建立 待高效液相色谱仪稳定后，将5.2.5.2处理得到的系列标准工作溶液用孔径0.45um的微孔滤膜 过滤后，用微量进样器分别注入色谱仪，每个浓度的标准工作溶液均平行测定三次，以标准工作溶液的 浓度为横坐标，以三次平行测定得到的外标物峰面积平均值为纵坐标，绘制标准工作曲线。 5.2.5.5待测产品的测定 将5.2.5.3处理得到的溶液用孔径0.45μm的微孔滤膜过滤后，用微量进样器注入色谱仪，平行测 定三次，计算得出三次平行测定的待测产品峰面积平均值，该平均值应在标准工作曲线范围内。 5.2.6分析结果的计算与表述 5.2.6.1产品的纯度 产品的纯度按式（1)计算： (1) m 式中： X——13C、15N双标记-氨基脲产品纯度的数值，以质量分数(%)表示； c——待测产品峰面积平均值在标准工作曲线上对应的产品溶液浓度的数值，单位为毫克每毫升 (mg/mL); V-一待测产品溶液的定容体积的数值，单位为毫升（mL）； XsT一一氨基脲标准品标注纯度的数值，以质量分数（%）表示； 待测产品的称样量的数值，单位为毫克（mg）。 5.2.6.2允许差 三次平行测定结果的相对偏差绝对值≤0.5%。 5.313C、15N同位素丰度气体同位素质谱法 5.3.1样品制备的方法及原理 利用氧化铜作为供氧剂，使13C、15N双标记-氨基脲样品在高温下发生氧化反应，产生13C标记的二 氧化碳气及15N标记的氮气。将13CO2及15N2两种气体分别引人气体同位素质谱计，用质谱法测定待 测氨基脲样品的13C、15N同位素丰度值。 5.3.2试剂和材料 5.3.2.1氧化铜：分析纯； 5.3.2.2液氮； 5.3.2.3无水乙醇：化学纯。 5.3.3仪器和设备 5.3.3.1通常实验室用玻璃仪器及设备。 5.3.3.2气体同位素质谱计。 5.3.3.3样品转化真空系统。 该系统由玻璃制成，配置机械真空泵及油扩散泵，系统真空度可达10-2Pa或更高，具体规格参见 GB/T 20622—2006。 5.3.3.4玻璃样品转化管： 其具体规格见HG/T3789—-2005。 HG/T4366-2012 5.3.3.5煤气喷灯； 5.3.3.6马弗炉。 5.3.4分析步骤 5.3.4.1样品转化 称量1.0mg~1.5mg试样置于玻璃样品转化管中，精确到0.1mg。同时加人10mg~20mg氧化 铜，将样品管接入样品转化真空系统，利用机械真空泵及油扩散泵抽除空气，同时以煤气喷灯烘烤样品 管壁去除吸附的水汽及其他杂气。待系统真空度小于1×10-2Pa时熔封样品管。将样品管放人马弗 炉中，530℃灼烧3h，冷却至室温后取出样品管待用。 5.3.4.2样品测定 对气体同位素质谱计进行必要的参数校正和本底测定后接入经5.3.4.1处理得到的样品管，利用 质谱计的进样系统抽真空。待真空度低于2X10-5Pa后将连接样品管与质谱计进样系统的阀门关闭； 同时打破样品管的毛细部分，用液氮冷冻3min，将样品管内的15N2引人质谱计，按照电脑设定的程序 自动测定，打印输出相应的信号峰强度数据。通过公式计算得到待测样品的15N丰度值。完成15N丰 度值的测定后在液氮冷冻状态下利用质谱计的进样系统将样品管内的残余15N2抽走，再次关闭连接样 品管与质谱计进样系统的阀门，移除液氮。待样品管温度恢复至室温后利用液氮/无水乙醇混合液冷冻 3min，将样品管内的13CO2引人质谱计，按照电脑设定的程序自动测定，打印输出相应的信号峰强度数 据。通过公式计算得到待测样品的13C丰度值。 5.3.5质谱条件 离子源发射电流：0.040mA 电子能量：98.60eV 耕电压：133.15V 离子源温度：160℃ 高压：10kV 接收器：法拉第筒 5.3.6分析结果的计算与表述 5.3.6.115N丰度值 15N同位素丰度值以Ei计，数值以at.%15N表示，按式（2)计算： 2 (2) 式中： E 待测样品的15N同位素丰度值，单位为at.%15N； I29 质量数为29的电信号强度值，单位为毫伏（mV）； 130——质量数为30的电信号强度值，单位为毫伏（mV）。 5.3.6.213C丰度值 13C同位素丰度值以E2计，数值以at.%13C表示，按式（3)计算： I45 X100 (3)