SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4292—2015 家蚕微粒子病检疫技术规范 Quarantine protocol for pebrine 行业标准信息服务平台 2015-09-02发布 2016-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4292—2015 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 入境检验检疫局。 本标准主要起草人：何永强、吴姗、曹琛福、鲁兴萌、黎昊雁、帅江冰、张晓峰、朱振江、戴云通、王素华 李晓军。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4292—2015 家蚕微粒子病检疫技术规范 1范围 本标准规定了家蚕微孢子虫的实验室检测，包括光学相差显微镜检查法、聚合酶链式反应（PCR）法 和实时荧光PCR法。 本标准适用于进出境家蚕微粒子病的检疫。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 家蚕silkworm（Bombyxmori) 家蚕为完全变态昆虫，具有卵、幼虫、茧和蛾（成虫）四个虫态。 3.2 蚕卵（蚕种）silkwormegg 蚕卵外观略呈扁平椭圆形，一端稍尖为前端，另一端稍钝为后端，膨起的一方为腹侧，与腹侧相对的 一方为背侧。 蚕种是指用于养蚕生产和商业的蚕卵 3.3 蚕幼虫silkwormlarva(larvae) 从卵孵化后的蚁蚕到化蛹期间的蚕，蚕幼虫呈长圆筒形，背方为圆形，分头部、胸部和腹部3个明显 的体段。 3.4 蚕茧silkwormcocoon 蚕从吐丝器吐出丝物质后形成的，呈椭圆形和球形等形状，外为丝物质内存蚕的蚕阶段。蚕茧分 为干茧（driedcocoon）和鲜茧（freshcocoon）。前者是经过60℃～120℃干燥处理6h，充分干燥的蚕 茧，后者是未经高温干燥处理的活蛹蚕茧。 3.5 蚕蛾silkwormmoth 分头胸腹3个体段，中后胸各有一对翅，全身被白色鳞片。 3.6 蚕微孢子虫 nosemabombycis;Nb 属原生动物界微孢子虫门，微孢子虫目，微孢子虫属，呈椭圆形，大小约为（3μm～4μm）×（1.5μm~ 1 SN/T4292—2015 2μm）,是蚕微粒子病的病原体 3.7 产附aspect of laid eggs 家蚕母蛾将蚕卵产于蚕连纸或夏布上的附着情况。 4临床病症 4.1蚕幼虫的病症 体色不正常，呈锈色，大小不均匀，发育迟缓，举动不活泼。小蚕期表现为收蚁后不疏毛，体色深暗， 体躯瘦小，易发生“细蚕”；蚕儿稍大后出现焦尾蚕、焦足蚕和半脱皮蚕、不脱皮蚕，蚕体小，皮肤多皱褶 4.2蛹体病症 出现大肚蛹，腹部环节松弛，环节上有大小不等的病斑，体表无光泽，反应迟钝。 4.3 蛾体病症 出现卷翅蛾，羽化后长期不展翅，或展翅不全；蛾体腹部有大小不等黑斑的黑星蛾；蛾体鳞毛脱落 呈焦黄色的秃蛾；蛾体腹部节间伸长松弛的大肚蛾，翅短小，病蛾交配能力差，产卵少，产附不整齐。 4.4 蚕卵病症 卵形不正，大小不均匀，排列不整齐，产重叠卵，易脱落，不受精卵、死卵多。 5实验室诊断 5.1买 光学相差显微镜检查法 5.1.1 材料和设备 行业标准信息服务平 5.1.1.1 盖玻片。 5.1.1.2 拭子。 5.1.1.3 剪刀。 5.1.1.4 镊子。 5.1.1.5 PRO250捣碎机或其他等效设备 5.1.1.6 纱网：50目~100目。 5.1.1.7 离心管(1.5mL5mL、15 mL)。 5.1.1.8 光学相差显微镜（600倍或400倍）。 5.1.2样品待检液制备 采取家蚕的卵（或幼虫、茧、母蛾等）样品，按照1：10加人生理盐水，用PRO250等捣碎机充分捣 碎（经过干燥处理或放置时间较久的样本，则需浸泡12h后再捣碎；鲜活5龄幼虫需解剖取中肠，用中 肠捣碎），匀浆液用纱网（规格50目100目）过滤，收集滤液。滤液差速离心（500r/min，离心1min， 弃沉淀，然后上清液以5000r/min，10min离心，弃上清液）2次～3次。用适量（约样本质量体积比的 1倍～10倍）生理盐水悬浮，作为微孢子虫待检液，立刻使用或一20℃冰箱保存。 2