SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2248—2009 化学品 胚胎发育毒性试验方法 ChemicalsTest method of prenatal developmental toxicity 2009-02-20发布 2009-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2248—2009 前 言 本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试方法No.414（2001年01月）《胚胎发育 毒性》（英文版）。 在标准文本格式上按GB/T1.1一2000做了以下编辑性修改，主要差异如下： 增加了范围部分； 将OECD化学品测试方法No.414中有关方法的介绍、目的、范围等改为本标准的引言。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局 本标准参与起草单位：中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：周志荣、钟邦奇、马中春、杭晨、陈健、顾政、魏洪兵。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 1 SN/T2248—2009 引 言 本标准主要提供受孕期染毒对受孕母体和胚胎发育影响的一般性信息，其主要是对母体效应、死 亡、结构畸形或胎儿发育改变的评价。功能缺陷虽然也是发育的一个很重要的部分，但不是本标准的 内容。 一些修改。当有足够的科学事实证明，对试验的修改会产生一个更加有意义的结果时，则这种修改是可 以接受的，此时，需将相应的科学事实在试验报告中列出。 = SN/T2248—2009 化学品 胚胎发育毒性试验方法 1范围 本标准规定了化学品胚胎发育毒性试验的原理、试验方法和程序。 本标准适用于化学品的胚胎发育毒性试验。 2术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 2. 1 developmentaltoxicology 发育毒理学 是用来研究受孕前、出生前发育、出生后直至性成熟前有害因素对发育中的个体产生有害作用的科 学。发育毒性主要包括：生物体的死亡、生物体组织畸形化、发育的改变及机能缺陷等。发育毒理学通 常又称为畸形学。 2. 2 副作用 adveseeffect 任何由染毒引起的与基线（正常水平)的偏离，主要表现生物体生存能力、生殖能力以及适应环境能 力的减弱。考虑到发育毒性，在广义上副作用包括任何影响生物体正常发育（在出生前后)的外在作用 2.3 发育改变 alteredgrowth 子代器官、体重或体型的改变 2. 4 异常 alterations(anomalies) 生物体在发育过程中产生的结构异常，包括畸形和变异。 2.5 畸形 malformations 对生物体有害的结构改变（有时可能是致命的），而且通常很罕见。 2.6 变异variation 对生物体几乎无害的结构改变，这种结构改变可能是暂时的，在对照组可能会相对频繁发生。 2.7 孕体 conceptus 是指从受精开始直到出生的各发育阶段，由受精卵演变过来的胎膜、胚胎或胎儿的总和。 2.8 着床nidation 胚泡附着到子宫的上皮内层的过程，主要包括胚泡穿透子宫上皮，并埋人子宫内膜。 2. 9 胚胎 embryo 生物体的早期或发展阶段，特别是受精卵在轴向分裂的发育产物，至所有主要结构的出现， 1 SN/T2248—2009 2.10 胎仔foetus 指胚胎后期未出生的子代。 2. 11 胚胎毒性foetotoxicity 对胎儿的正常结构、发育、生长以及生存能力的有害作用， 2. 12 流产abortion 未发育成熟的生物体（胚胎或死亡胎儿）从子宫内分娩出来。 2.13 再吸收 resorption 是指植人进子宫的孕体随后死亡并正被或已经被再吸收。 2.14 未观察到有害作用的剂量水平noobservedadverseeffectlevel（NOAEL） 没有观察到任何毒性效应的最高剂量水平。 3原理 通常情况下，将已经妊娠的动物暴露于受试物下，暴露时间从着床到预定处死的前一天。处死时间 应尽可能与正常分娩的时间接近，以避免由于早产导致试验数据的丢失。本标准不仅对生物体器官形 成期进行观察（啮齿动物一般5d～15d，兔子一般6d～18d)，而且也能检查着床前以及经过整个妊娠 期直到部宫产前一天这一段时期的影响。在处死妊娠动物后立即进行宫产，并检查子宫内容物，评价 胎仔的软组织和骨骼的改变情况。 4试验准备 4.1动物的选择 推荐使用最相关并常用于胚胎发育毒性试验的动物品系。啮齿类动物最好用大鼠，非啮齿类动物 最好用家免。如果使用其他品系的试验动物，要给出适当的理由。 4.2饲养条件 4.2.1啮齿动物的饲养房间温度应控制在22℃土3℃，家兔饲养房间温度应控制18℃土3℃。除动 物房清洁期间外，动物房相对湿度要控制在30%～70%，最好控制在50%～60%。采用人工照明，应按 照12h照明/12h黑暗的顺序循环。以常规试验动物饲料喂饲，饮水不限。 4.2.2动物交配应选择在合适的笼中进行。交配的动物最好单笼饲养，也可每组少数动物一起饲养。 4.3动物的准备 4.3.1应使用未进行过试验的健康动物。正式试验前要将动物至少饲养5d以适应实验室环境。试 验动物应标明种、系、来源、性别、体重和/或周龄。临近试验前，所有染毒组试验动物的体重和年龄要尽 量一致。每一剂量组均应使用未生育过的成年雌性动物。应将雌性动物与来自同一品系的雄性动物进 行交配，同时要避免近亲交配 4.3.2对于啮齿类动物而言，阴道有精子或发现阴栓的当天定为妊娠第0天；而对于家兔而言，一且发 生了交配或进行了人工授精，则认定为妊娠第0天。应将交配的雌性动物随机分为对照组和染毒组。 试验笼的放置应尽量避免由于试验笼的安放位置不同对试验造成的影响。每一动物都应有唯一编号。 如果雌性动物是成批进行交配，则需将每一批的雌性动物平均分配到各个组，跟同一雄性动物交配的所 有雕性动物也应平均分配到各个组。同样，采用同一雄性天鼠的精子进行人工授精的孕鼠也应当平均 分配到各个组。 2 SN/T 2248—2009 5试验步骤 5.1动物数量和性别 试验组和对照组应有足够数量的雌性动物，以保证在尸检时约有20只妊娠动物。每组不得低于 16只妊娠动物。妊娠动物的死亡率不得高于10%。 5.2剂量准备 如果使用了赋形剂或其他的添加剂以便制备制剂，则应考虑到以下因素：对受试物的吸收、分布以 及滞留或排泄的影响，对受试物化学性质的影响（有可能改变其毒性特征），对动物的取食或饮水或营养 状况的影响。赋形剂既不能对动物具有发育毒性，也不能影响其生殖。 5.3用量 5.3.1通常，应该从受精卵着床当天（例如交配后第5天）至剖宫产前一天对妊娠动物每天给予受试 物。如果预试验结果没有显示存在高潜在性的着床前吸收，则要在整个妊娠期，即从交配当天至处死前 一天给予受试物。众所周知，妊娠期不适当的处理或应激常常会导致流产。为消除非处理因素导致的 流产，应避免对妊娠动物进行不恰当的处理以及来自外部因素如噪声等的应激作用。 5.3.2试验至少设三个剂量组和一个平行对照组。应将健康动物随机分为对照组和染毒组。剂量水 平的设置应能反映毒性效应的不同等级。在受试物理化和生物特性允许的条件下，最高剂量应引起 些发育和（或)母体毒性（如临床症状或体重下降），但不能引起死亡或严重损伤。至少有一个中间剂量 组要引起轻微的可观察到的毒性效应。最低剂量则不引起任何母体毒性或发育毒性。剂量水平的递减 顺序应能反映剂量-效应关系和未观察到有害作用的剂量水平（NOAEL)或接近检测限的剂量，而这一 剂量可作为测试的基准值。 5.3.3递减组间距通常选择2倍～4倍，如果要设置第4个剂量组，该剂量组的组距则可以很大（例如 超过10倍）。在饲养试验中，剂量组的间距不能超过3倍。虽然得出母体无可观察损害作用的剂量水 平（NQAEL)是目标之一，但没有对此剂量水平进行估计的试验也是可以接受的。 5.3.4剂量水平的选择要考虑到现有的毒理数据以及关于受试物或相关物质的毒代动力学方面的所 有信息。这些信息可用于确定染毒频次。 5.3.5应设立一个平行对照组。该组应是阴性对照组。如果使用了赋形剂，还要设立一个赋形剂对照 组。每个组都要给予相同体积的受试物或赋形剂。对照组的处理方式应与染毒组一致。赋形剂对照组 应使用最高剂量的赋形剂（类似于最低剂量组）。 5.4限量试验 按照本试验的程序，经口给予至少1000mg/（kg体重·d)的剂量而没有产生可观察到的毒性效应 并且依据现有的数据（例如从结构和/或代谢相关的化合物中获得）推测没有毒性，则没有必要进行三个 剂量水平的完整试验。从人类暴露资料推测，在有些限量试验中需要使用更高的经口染毒剂量水平。 对于其他的染毒途径，比如吸入或经皮染毒，常常可参考受试物的理化特性来确定可达到的最高染毒浓 度（例如，经皮染毒时应不导致严重的局部毒性反应）。 5.5染毒 5.5.1受试物或赋形剂通常通过插管法经口染毒。如果使用其他染毒方式，应说明其合理性。应在每 天的同一时间给予受试物 5.5.2应根据最近的个体体重对每只动物进行染毒。但在妊娠晚期要对剂量进行适当的调整。可利 用现有的数据来选择相应的剂量以免造成过度的母体毒性反应。如果染毒动物出现了严重的、过度的 毒性反应，则应将动物处以安乐死。如果有一些妊娠动物出现了严重的毒性反应，则要终止该组试验。 如果受试物是采用灌胃法给予，则要用胃管或合适的插管一次给予受试物。应根据动物大小来确定一 次的最大灌胃量。每次给液量不超过1mL/100g体重；对于水