SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1638—2005 国境口岸莱姆病监测规程 Codes of surveillance for Lyme disease at frontier port 2005-09-30发布 2006-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1638—2005 前 言 本标准附录C为规范性附录，附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫 局、齐齐哈尔市商业职工医院。 本标准主要起草人：范东辉、郭晓明、张国彬、曹晓兰、李明、吴刚、薛芳。 本标准为首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T·1638-2005 国境口岸莱姆病监测规程 范围 本标准规定了国境口岸莱姆病的监测对象、内容与方法、结果处置。 本标准适用于检验检疫系统对国境口岸莱姆病疫情的监测。 2．规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB16882动物鼠疫监测标准 SN/T1293国境口岸蜱类监测规程 SN/T1312 国境口岸森林脑炎监测规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 游走性红斑 erythema migrant,EM 典型者开始为红色斑疹或丘疹，数天或数周内向周围扩散形成大的圆形皮损，中心色淡。单个皮损 直径至少为5cm，可发生继发性皮损。多数患者通常伴有其他急性症状，如疲乏、发热、头痛、轻度颈强 直、关节痛及肌痛，这些症状呈间歇性。但叮咬后数小时内出现的环状红斑系机体超敏反应所致，不属 于EM。 4对象 4.1 国境口岸莱姆病监测人群，包括： 边境居民； 人出境人员； 国境口岸工作人员。 4.2莱姆病传播媒介和宿主动物，包括： 传播媒介，已证实的传播媒介为全沟硬蜱Irodespersulcatus、肩突硬蜱Icodesscapularis （=I.dammini）、太平洋硬蜱Ixodespacificus、子硬蜱Irodesricinus。 宿主动物，主要是啮齿动物，家畜、鸟类、爬行动物也可成为贮存宿主。 4.3来自疫区的动物。 4.4国境口岸生态环境。 5内容与方法 5.1资料的收集 监测活动应收集以下资料： SN/T1638—2005 一利用各种方式收集国内、国际莱姆病疫情资料； 同地方疾病预防控制机构、医疗机构、涉外宾馆、俱乐部及动物防疫机构建立莱姆病疫情报告、 通报制度，定期进行疫情资料的整理分析并互通疫情情报； 一建立健全口岸莱姆病登记制度； 一通过统计部门收集监测地区的人口资料； 一利用本底调查等方式收集动物贮存宿主及媒介分布资料。 5.2人群疫情监测 5.2.1现场监测 病例。具有游走性红斑者或至少有一种下列表现并经实验室证实感染者可诊断为莱姆病： 一肌肉骨骼系统表现，反复发作的、短时间（持续数周或数月）的一个或几个关节受累，有时可发 展为慢性关节炎。但发病前无短暂受累期的慢性进行性关节炎及慢性对称性多关节炎应 除外。 神经系统表现，包括淋巴细胞性脑膜炎、脑神经炎、特别是面神经麻痹（可为双侧）、神经根病或 较少见的脑脊髓炎。其中脑脊髓炎诊断应有脑脊液抗博氏包柔螺旋体抗体检测的依据，且脑 脊液抗体滴度应比血清高。仅有头痛、疲乏、感觉异常及轻度颈强直应除外。 一心血管系统表现，急性起病（ⅡI度或Ⅲ度）房室传导阻滞，常在数天或数周内恢复正常。单纯的 心悸、心动过缓、束支传导阻滞或心肌炎应除外。 5.2.2血清学监测 运用血清流行病学方法，在国境口岸重点人群中收集300份血清进行检测，血清学检测方法参见附 录A或采用经国家食品和药品监督管理部门批准生产的试剂盒，并严格按照操作说明进行检测，查清 本口岸地区人群的莱姆病感染状况。 5.2.3个案调查 在国境口岸地区发现莱姆病病人，应进行流行病学调查，着重询问林区旅行史、宠物接触史和蜱的 叮咬史，并填写个案调查记录，参见附录B。 5.3媒介与宿主动物监测 5.3.1每年开展至少4次媒介和宿主动物的调查。 5.3.2国境口岸鼠类种群密度及季节消长情况监测方法按照GB16882进行，鼠的带蜱率调查方法按 照SN/T1312进行。 5.3.3国境口岸蜱类种群密度及季节消长情况监测方法按照SN/T1293进行，蜱的带菌率调查方法 见附录C。蜱在保存和运输时应放置于玻璃管内，并加人适量的湿滤纸条，以三层纱布封住管口，放在 阴凉处或4℃冷藏。 5.3.4宿主动物血清学调查方法参照5.2.2进行，血清学检测使用诊断试剂盒。 5.4来自疫区的动物监测 使用诊断试剂盒对来自疫区的动物进行莱姆病血清学调查。 5.5 口岸生态环境监测 生态环境监测内容包括： 动物地理区特点，如动物种群构成和分布； 气象特点，如月平均气温、相对气湿、降水量； 一地貌特点，如山地、丘陵、荒漠、草原、洼地、水源、岛屿、植被种类与面积； —地质特点，如地表层结构土质、岩石； 一生产活动特点，如地表建筑、生活设施、储运货物类型和种植业、养殖业类型。 2 SN/T1638—2005 处置 6.1 疫情通报 监测中发现莱姆病病人后，应向上级主管部门报告，同时向当地卫生行政部门通报。 6.2防护措施 对前往有确诊的莱姆病病人或已证实有蜱媒介感染伯氏疏螺旋体的区域的人员，应采取防止蜱叮 咬措施。 6.3监测报告 根据年度监测结果汇总监测地区人口资料、动物贮存宿主及媒介分布资料，写出国境口岸本年度 莱姆病监测报告。报告中应包括如下内容： -监测概况； 监测方法； 监测结果； 结论； 预防措施和建议。 SN/T1638—2005 附录A (资料性附录） 莱姆病抗体的血清学检测 间接免疫荧光抗体法（IFA） A.1.1材料 A.1.1.1多孔抗原片：用国内参照菌株PD91,用BSK培养基培养，常规制备，每视野（40×10)螺旋体 数不少于100条。一20℃干燥保存。 A.1.1.2 羊抗人或兔抗人IgM或IgG荧光素结合物。 待检病人血清。 A.1.1.3 A. 1. 1.4 荧光显微镜。 常用稀释液、试剂及设备（37℃恒温孵箱等）。 A. 1.1.5 A. 1.2 检测步骤 A.1.2.1 血清从1：16开始，用3%卵黄囊PBS(pH7.2,0.01mol/L)稀释，2倍连续稀释至需要稀 释度。 取出抗原片，室温风干，用加样器依次从高稀释度至低稀释度方向逐个加人已稀释的待检血 A.1.2.2 清10μL~15μL，37℃，保湿反应30min。 A.1.2.3用pH7.20.01mol/LPBS浸泡10min，纯水漂洗3次，室温风干。 A.1.2.4按一定的工作稀释度，用pH7.20.01mol/LPBS稀释荧光结合物，每孔加人 10μL~15μL，37℃，保湿反应30min。 A.1.2.5用pH7.20.01mol/LPBS浸泡10min，纯水漂洗3次，室温风干，90%甘油封片。 A.1.2.6荧光显微镜（4010)下检查，每视野下不少于50%的螺旋体染上明亮的荧光者可判为阳性。 十十十：菌体稍膨胀，呈明亮的淡绿色荧光； 十十：菌体清晰，呈明亮的淡绿色荧光； 十：菌体能分辨清楚，但荧光亮度稍差； 士：菌体模糊，形态不典型，亮度差； ：看不见菌体。 A.1.3结果判定 以+”为判定终点，单份血清滴度，IgM≥1：64，IgG≥1：128,或双份血清抗体滴度呈4倍增高 者，可判为阳性反应。 A.1.4意义 双份血清IgG阳性稀释度呈四倍或四倍以上增高者，可确诊感染。单份血清检测IgG阳性，-般 表明其曾受过莱姆病螺旋体感染；IgM阳性，结合临床表现及流行病学史，亦可确定为新近或活动性 感染。 A.2酶联免疫吸附试验(ELISA） A.2.1材料 A.2.1.1聚苯乙烯塑料板，96孔、可拆式、U型板。 A.2.1.2可变微量加样器，10μL~200μL。 A.2.1.3抗原制备：用BSK培养基常规培养中国莱姆病螺旋体参照菌株PD91，以10000r/min离心 30min，0.01mol/LpH7.4PBS洗涤3次，收集菌体，冰镇下超声粉碎30min，4000r/min离心20min，去 4 SN/T1638—2005 2mg/mL~4mg/mL,测定蛋白含量，十二烷基硫酸钠（SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，所得样品含有外 膜蛋白A(32KD)、外膜蛋白B(36KD)、外膜蛋白C(22KD)和鞭毛蛋白(41KD)四种纯化蛋白抗原。 (0.01mol/LpH7.4PBS加0.01%硫柳汞和1%牛血清白蛋白）。 A.2.1.5阳性对照血清（典型病人阳性血清)，阴性对照血清(无暴露史的健康人血清）。 A.2.1.6包被液：0.1mol/LpH9.6的碳酸盐缓冲液。 A.2.1.7 洗涤液：即0.01mol/LpH7.4PBS-T(NaCI8.0g,KHzPO,0.2g，KCI0.2g， NaHPO,·12H.02.9g，H01000mLTween-200.5mL)，高压后使用。 A.2.1.8 稀释液：即高压后的PBS-T液加5%牛血清。 A.2.1.9 底物液：以柠檬酸、磷酸氢二钠和EDTA为缓冲系统加TMB和过氧化氢尿素配制的显色底 物，配方见表A.1。 表A.1底物配方 A液 B液 磷酸氢二钠 36. 82 g 柠檬酸 10. 5 g