SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1312—2003 国境口岸森林脑炎监测规程 Codes of surveillance for forest encephalitis at frontier port 2003-08-18发布 2004-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 国境口岸森林脑炎监测规程 SN/T1312—2003 中国标准出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×12301/16 印张1/2字数12千字 2003年12月第一版2003年12月第一次印刷 印数1-2000 书号：155066·2-15446 网址www.bzcbs.com 版权专有 侵权必究 举报电话：（010)68533533 SN/T1312—2003 前言 本标准的附录A、附录B为规范性附录，附录C为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理标准化委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：刘辉、肖庆昕、彭连慧、刘伟、杨秀娟、常春雨。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T1312—2003 国境口岸森林脑炎监测规程 1范围 本标准规定了国境口岸森林脑炎的监测对象、内容和方法。 本标准适用于国境口岸森林脑炎的疫情监测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB16882动物鼠疫监测标准 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 森林脑炎forestencephalitis 由虫媒病毒B群中蜱媒脑炎病毒引起的自然疫源性疾病。 3. 2 森林脑炎监测forestencephalitissurveillance 在森林脑炎疫源地内定期地监测森林脑炎的流行动态，观察宿主动物及媒介昆虫生态，研究森林脑 炎感染、传播、自然宿主储存规律及地理分布特征。 4准备 4.1监测器材 带防蚊盖的鼠盒、注射器、针头、剪刀、镊子、手术刀柄、手术刀片、外科橡皮手套、有盖塘瓷缸、昆虫 瓶、有孔载玻片、盖玻片、微量血凝板、75%乙醇、来苏儿、碘酒、新配制新洁尔灭液、微孔滤膜、微量离心 管、移液器及枪头聚乙烯塑料尖头。 4.2检验器材 4.2.1用于病毒材料或者可疑病毒材料的玻璃器材及器械，使用后立即浸人5%来苏儿或者1%次氯 酸钠浸泡，洗刷于净后，经121℃，30min高压蒸汽灭菌。 4.2.2有机玻璃制品在2%氢氧化钠溶液浸泡，冲洗干净后，再用3%盐酸溶液浸泡15min，蒸馏水漂 洗三次，甩干后在紫外灯下照射20min。 5监测对象 国境口岸范围及国境口岸区域向外延伸400m范围内。包括： 职工居住生活区； 货物存放库区； 垃圾处理场与公共厕所； 饭店与职工食堂； 食品加工厂； SN/T1312—2003 旅客候船（飞机、车）楼、厅； 畜禽饲养场； 口岸周围农田和林区； 码头、停机坪、车站隔离带、绿化带草地、花园； 开放性排水沟渠。 6监测内容 6.1疫情动态 利用各种方式收集国内、国际森林脑炎疫情资料。 6.2传染源监测 国境口岸地区一旦发现森林脑炎病人，应立即采取隔离措施或留验观察，并进行流行病学调查。查 清本口岸地区森林脑炎的传染源，人群中流行强度、流行范围与地理环境关系。 6.3医学生物监测 6.3.1种群监测 种群监测包括以下内容： 监测啮齿动物生态环境的变化和种群变动与消长； 监测传染病媒介昆虫和种群的组成； 监测本口岸媒介生物的侵入情况； 监测本口岸与外侵的啮齿动物和病媒昆虫对本口岸、本地区相关传染病的影响。 6.3.2数量监测 鼠密度和鼠的带蜱率。 6.3.3病原学监测 鼠及其他动物的带毒情况以及蜱的带毒率监测。 ，7监测方法 7.1建立疫情监测网 检验检疫部门同地方防疫部门、医疗卫生机构、涉外宾馆、俱乐部建立森林脑炎疫情报告制度，定期 进行疫情资料的整理分析并互通疫情情报。 对口岸人群及鼠类进行经常性的流行病学调查，做好流行病资料的整理，统计分析，掌握口岸地区 本病的流行特征。 7.2流行病学调查 在发生病例或疑似病例时分别采取个案调查、专题调查、回顾性调查方法，分析、整理所获得的流行 病学资料，掌握流行特征。 7.3血清流行病学监测 在国境口岸人群中进行回顾性调查和前瞻性调查，均可使用血清学流行病学方法，常用的有：红细 胞凝集抑制试验、间接免疫荧光试验、酶联免疫试验、中和试验方法。 7.4动物流行病学调查 国境口岸鼠类种群密度及季节消长情况监测方法按照GB16882进行，鼠的带蜱率调查方法见附 录A；蜱的带毒率调查方法见附录B；对捕获鼠的解剖鉴定参照附录C进行；宿主血清学调查方法参照 7.2血清流行病学调查方法进行。 8监测报告 检测报告中应包括如下内容： 监测内容及监测方法； 监测结果； 结论及有针对性的预防措施或控制对策建议。 2 SN/T1312-—2003 附录A （规范性附录） 鼠体带蜱率调查方法 A.1调查数量 各类鼠在监测期间内，每旬随机抽取20只活体主要宿主动物进行检蜱。 A.2 调查方法 捕获的活体主要宿主动物，单只装袋，在检蜱室用乙醚麻醉后，用篦子或毛刷梳蜱，获得蜱进行鉴定 分类，以同一宿主，同一区域，同一种类分组送检。 A.3计算鼠体带蜱率 计算方法见式(A.1) 带蜱鼠数 鼠体带蜱率： X 100% (A.1) 总鼠数 附录B （规范性附录） 蜱带毒率调查方法 B.1采集鼠体上的蜱，经分类鉴定蜱种后按照不同的属种分类，分别放入消毒的小管内。 B.2在常温下待蜱所吸的寄主血液完全消化后，一80℃或液氮保存，用作病毒分离的标本。 B.3以同种蜱20只为一批，用0.002%硫柳汞进行体表消毒。 B.4分别用含有100μg/mL青霉素和100μg/mL链霉素的无菌磷酸缓冲液（pH7.2,0.01mol/L PBS)洗涤虫体，反复洗涤三次。 B.5 加入含10%小牛血清的PBS，于冰浴中研磨将组织制成10%组织悬液。 B.6 .将组织悬液置于一20℃冰箱中反复冻融三次，10000r/min4℃离心20min。 B.7 取上清液用孔径为45um微孔滤膜过滤除菌。 每份滤液接种2d～5d龄乳鼠八只，每只鼠脑内按种0.02mL，接种后每天观察鼠的发病情况， B.8 发现濑死鼠及时取脑传代，潜伏期稳定后进行鉴定。未发病者于接种后10d剖取鼠脑制成10%悬液盲 传两代，观察21d仍不发病判定为阴性。 B.9取发病鼠的脑组织制备病毒悬液，进行病毒分离株的鉴定。 B.10经分离鉴定为阳性的样品数为蜱中分离毒株数。 B.11计算检出率和最低带毒率 根据从蜱中分离的病毒阳性数计算蜱的带毒率。检出率和最低带毒率计算方法分别见式（B.1)、 式(B.2)。 检出率二 .(B.1 ) 分组数 分离毒株数 最低带毒率一 ×100% (B.2) 蜱检测总数 注：最低带毒率是指每只蜱森林脑炎病毒的携带率。 SN/T1312—2003 SN/T 1312-2003 附录C （资料性附录） 鼠解剖鉴定方法 C.1对可疑发病动物或发病感染鼠的检查应在动物症状齐备或死亡后立即进行，接种小白鼠后表现 症状为昏睡，展颤，运动失调，惊厥，挛，麻痹，衰竭和死亡。 C.2组织器官检查：待解剖鼠除了口鼻外，可全部浸入3%来苏中消毒3min～5min，然后用碘酒及酒 精消毒皮肤，从下颌额部沿中线垂直下行到耻骨联合切开皮肤和肌肉，再从上下缘分别向两侧剪开，分开 皮肤和肌肉，依次打开腰腔和胸腔，取出其中所有脏器和有关组织，观察体液性状和液量仔细检查有无 病变，并进行记录。 C.3脑组织检查：将动物背面朝上放置，将头部固定；用碘酒消毒后，从头的中间纵行切开头皮和肌 肉，将皮肤和肌肉向两侧分开，用剪刀沿脑部边缘做一环形切口，移除切开的骨片，剪开脑膜并切断所有 脑神经，将脑取出，做进一步的检查。 鼠脑组织抗原检查：在小鼠脑海马回部位横切做冷冻切片，用地丙酮固定10min，干后密封保存于 一30℃。.以正常脑组织做对照，用异硫氰酸荧光素（FITC)标记抗鼠森林脑炎病毒抗体做免疫荧光检 查。抗原阳性病历在感染细胞的胞浆内出现明亮的黄绿色荧光，对照细胞或鼠脑片应无非特异性荧光。 C.4对有典型病变组织剪取小块放于10%福尔马林中固定以做常规病理学检查。 C.5要做病毒分离的脑、肝、脾、肾组织，可以低温（一20℃)保存，供分离传代用。方法见附录B。 C.6 解完毕后的动物户体，放于有盖塘瓷缸内，经高压消毒于焚烧炉中销毁。 版权专有便权必究 书号：155066·2-15446 SN/T1312-2003